如何知道细胞培养液被污染了，下一步怎么办？

最好的办法就是彻底清除培养基，污染的细胞全部处理掉，用新的培养基，新复苏的细胞。缓解彻底打扫，紫外线消毒。这样就是最简单的，不要试图去逆转污染。这样最耽误时间。

要确定细胞培养液是否被污染，可以注意以下几个指标和观察：

1. 观察培养基外观：检查培养基是否呈现异常颜色、浑浊度或悬浮物。任何异常变化都可能是细胞培养液被污染的迹象。

2. 观察细胞形态：观察培养的细胞是否显示异常形态，如变形、聚集、不规则的细胞形状等。这些变化可能是污染导致的。

3. 观察细胞生长率：如果细胞生长缓慢、停滞或减少，可能是细胞培养液受到了污染的迹象。

4. 进行细菌培养：将一小部分培养液转移到无菌培养基上进行细菌培养。如果有细菌生长，那么细胞培养液可能受到了细菌污染。

一旦确定细胞培养液被污染，下一步可以考虑以下措施：

1. 停止使用受污染的细胞培养液：不要继续使用被污染的培养液来维持细胞生长。

2. 隔离和处理污染源：找出可能导致污染的原因，如可能受到污染的培养器具、试剂、操作区域等，并进行相应的隔离和清洁。

3. 更换培养液：将细胞转移到新鲜、无菌的培养液中，确保提供良好的培养环境。

4. 细胞检测和处理：对已经在受污染培养液中培养的细胞进行检测和处理。可以进行细胞培养板的再播种，或者使用无菌的处理方法，如细胞洗涤、离心等，以除去污染物。

5. 审查实验室操作：回顾实验室的操作流程和标准操作程序，确保正确的操作和无菌技术，以避免未来的污染问题。

单独培养细胞培养基，如果变浑浊或者显微镜下可以看见细菌则代表污染了

可以观察培养液是否清澈，也可以观察镜下是否有微生物。如果污染存在建议及时消毒杀菌

肉眼观察，把培养瓶或培养皿拿起来，对着光线检查。

浑浊情况。即使细胞密度很高，培养基也应该是透明的。轻轻移动或晃动培养瓶，观察培养基的浑浊或悬浮情况，一些霉菌可能会在培养基的表面形成菌落。

培养基颜色的变化。酸性条件下，加了酚红的培养基会由红变黄，而碱性条件下会变成红紫色。细菌污染常常会使培养基变成黄色，真菌污染会使培养基变成深紫红色。

闻！当然不能打开瓶子去闻，把鼻子贴在瓶口闻，许多污染发生以后都会散发出易察觉的、特殊的气味，甚至一打开培养箱门就闻到了。

显微观察

显微观察。在倒置显微镜下，先用低倍(10X) 再用高倍(40X) 物镜（总放大倍数为400) 观察细胞培养皿或培养瓶中的细胞。

其他有机体。在低倍镜下，真菌的菌丝体成长棒状，并横穿整个视野，还可以观察到酵母，有时呈小圆球形，有时还有芽。在高倍镜下可以观察到细菌，它们可能是棒状或球状，单独成链或成团存在，它们也可能和细胞混在一起，并且明显处于细胞内部，有些细胞可能已经裂解变得模糊。观察时可能每两个视野才出现一个污染（当然也算被污染了！），而且可能污染物是可以运动的。

损伤细胞。感染会杀死细胞，可能导致每个细胞都裂解和／或细胞层从附着物上完全剥离，更可能的是细胞变得不规则（或大或小），在低倍镜下是黑色的粒状。

悬浮培养细胞比贴壁培养细胞更加难以显微观察，尤其是高倍显微镜下。

将培养瓶或培养皿放在显微镜的载物台上，静置一会。

将焦距对准器皿的底部，观察那些轻微附着的细胞，因为它们可能已经接触到了微生物。

对准整个培养瓶焦距，当发现细胞的时候，用细聚焦调节旋钮调节，仔细检查周围的培养基有没有污染发生。