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以下是其中一些常用的方法:
1. 吞噬试剂:利用特定的吞噬试剂,如荧光染料,将其与被吞噬的颗粒(如细菌、微珠等)结合。这些试剂在细胞内被降解后,会发出荧光信号,从而表明细胞吞噬了目标颗粒。可以通过荧光显微镜或流式细胞术来检测和计量吞噬事件。
2. 色素染色:使用特定的染料,如吡罗红、尼格罗蓝等,将细胞和目标颗粒一起染色。通过显微镜观察和计数染色的细胞和目标颗粒,可以评估细胞吞噬能力。
3. 放射性核素标记:利用放射性核素标记目标颗粒,如放射性标记的细菌。将这些标记颗粒与待测细胞一起孵育,通过测量释放的放射性信号来评估吞噬活性。
4. 细胞内酶活性测定:通过检测吞噬过程中特定酶的活性来评估吞噬能力。例如,利用酶染色试剂如法罗基酯(Fluorogreen)或格兰酶(Granzyme)来检测细胞内溶酶体酶的活性。
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检测吞噬细胞功能的方法有吞噬试验,杀菌试验,NBT还原试验,化学发光测定法,趋化功能测定法。
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方法有:
1.吞噬细胞数量的检测:可作中性粒细胞绝对数的计算和骨髓检查。中性粒细胞<1.5×109/L(成人<1.8×109/L)时,可认为是中性粒细胞减少症,可导致严重感染,若<0.1×109/L可发生致死性感染。骨髓检查主要了解骨髓系粒细胞是否减少或缺如。
2.趋化功能试验:主要判断中性粒细胞运动状况,以了解其趋化功能。有体内试验,如皮窗试验和体外试验医|学教育网搜集整理。
3.吞噬和杀伤试验:主要检测白细胞或单核细胞的吞噬和杀菌功能。常用方法有①溶菌法;②白色念珠菌法;③化学发光法。计算白细胞或单核细胞的吞噬率和杀伤率。
4.四唑氮蓝还原试验(NBT试验):主要检测了解中性粒细胞的胞内杀菌能力。正常NBT阳性细胞在5%~10%,免疫缺陷时其值下降,如慢性肉芽肿常<5%.
5.粘附分子测定:近年来可用单克隆抗体检测细胞表面粘附分子,对了解吞噬细胞功能缺陷的精确度更高,可用流式细胞仪检查CD18、CD11b、CD11c、CD621等,可对粘附分子进行定量测定。
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测定体外细胞吞噬能力的方法有:
吞噬试验:通过检测吞噬细胞对底物的吞噬实现体外吞噬能力的检测,底物包括红细胞、大肠杆菌和酵母聚糖颗粒。
NBT还原试验:测量巨噬细胞在吞噬溶胶颗粒后,胞内呼吸爆发产生的超氧化物离子,经过一系列反应使NBT(氯化硝基四氮唑蓝)还原,形成黑色颗粒。
杀菌功能试验:通过测量吞噬细胞在吞噬细菌后,胞内呼吸爆发产生的超氧化物离子,经过一系列反应使H2O2形成羟基,从而破坏细菌的细胞膜,杀死细菌。