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检测融合基因的方法有哪些?

ZSCI

27772

最近融合基因大火,目前获批的药物有很大一部分也是针对基因融合的,比如前一阶段大火的 NTRK 融合以及肺癌中经常被提起的 ALK 融合等。

融合基因检测方法较多,小编整理了 7 种融合基因的检测方法:

一、qRT-PCR

理论上可检测融合 partner 和融合亚型,但是只能检测已知融合形式或者已知亚型,无法检测未知融合 partner 和亚型。

PMID:19136943,IF:41.577,Nature 2009 Mar 05;458(7234)

1、TICdb:肿瘤相关染色体易位数据库

网址:http://www.unav.es/genetica/TICdb

查找目的基因的融合对象以及融合基因序列。

2、COSMIC:肿瘤相关的体细胞突变、融合基因数据库。

网址:http://cancer.sanger.ac.uk/cosmic

3、CGAP:肿瘤相关染色体异常及融合基因数据库

网址:http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman


勾选此处结构异常,选择疾病名称。

例如:Acute myeloid leukemia 可查询相关疾病中的常见融合基因。

CGAP 应用举例:融合基因,点击基因名称,可进一步查询

  • 该基因在不同组织的表达情况

  • 融合蛋白相关信息

  • 基因功能

二、FISH

1、FISH 原理:

以荧光标记的已知核酸分子为探针,探针和靶序列双链 DNA 变性后杂交,互补的异源单链 DNA 分子在适宜的温度和离子强度下退火形成稳定的异源双链 DNA,通过荧光标记的抗体将半抗原显示出来,通过荧光显微镜观察杂交信号。

2、FISH 探针制备及检测步骤:

三、染色体显带技术

PMID:19136943,IF:41.577,Nature 2009 Mar 05;458(7234)

四、荧光原位杂交

荧光原位杂交举例:

ABL 探针以红色标记,BCR 探针绿色,黄色为融合信号。

五、高通量测序

RNA 测序联合全基因组 DNA 测序

INTEGRATE 首先利用映射和未映射的 RNA-seq 读数,然后分析来自肿瘤的 WGS(全基因组)读数。

PMID:26556708,IF:10.101,Genome Res. 2016 Jan;26(1)

六、RNA 测序

PMID:19136943,IF:41.577,Nature 2009 Mar 05;458(7234)

七、Ventana 免疫组化

Ventana ALK(D5F3)免疫组化可用于检测间变性淋巴瘤激酶 ALK 基因重排,并通过 2 个评分系统,第一个系统为二元评分算法,第二个系统为,半定量解释系统。

PMID:30572846,IF:3.288,BMC Cancer 2018 Dec 20;18(1)


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