检测融合基因的方法有哪些?
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最近融合基因大火,目前获批的药物有很大一部分也是针对基因融合的,比如前一阶段大火的 NTRK 融合以及肺癌中经常被提起的 ALK 融合等。
融合基因检测方法较多,小编整理了 7 种融合基因的检测方法:
一、qRT-PCR
理论上可检测融合 partner 和融合亚型,但是只能检测已知融合形式或者已知亚型,无法检测未知融合 partner 和亚型。
PMID:19136943,IF:41.577,Nature 2009 Mar 05;458(7234)
1、TICdb:肿瘤相关染色体易位数据库
查找目的基因的融合对象以及融合基因序列。
2、COSMIC:肿瘤相关的体细胞突变、融合基因数据库。
网址:http://cancer.sanger.ac.uk/cosmic
3、CGAP:肿瘤相关染色体异常及融合基因数据库
网址:http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman
勾选此处结构异常,选择疾病名称。
例如:Acute myeloid leukemia 可查询相关疾病中的常见融合基因。
CGAP 应用举例:融合基因,点击基因名称,可进一步查询
该基因在不同组织的表达情况
融合蛋白相关信息
基因功能
二、FISH
以荧光标记的已知核酸分子为探针,探针和靶序列双链 DNA 变性后杂交,互补的异源单链 DNA 分子在适宜的温度和离子强度下退火形成稳定的异源双链 DNA,通过荧光标记的抗体将半抗原显示出来,通过荧光显微镜观察杂交信号。
2、FISH 探针制备及检测步骤:
三、染色体显带技术
PMID:19136943,IF:41.577,Nature 2009 Mar 05;458(7234)
四、荧光原位杂交
ABL 探针以红色标记,BCR 探针绿色,黄色为融合信号。
五、高通量测序
INTEGRATE 首先利用映射和未映射的 RNA-seq 读数,然后分析来自肿瘤的 WGS(全基因组)读数。
PMID:26556708,IF:10.101,Genome Res. 2016 Jan;26(1)
六、RNA 测序
PMID:19136943,IF:41.577,Nature 2009 Mar 05;458(7234)
七、Ventana 免疫组化
Ventana ALK(D5F3)免疫组化可用于检测间变性淋巴瘤激酶 ALK 基因重排,并通过 2 个评分系统,第一个系统为二元评分算法,第二个系统为,半定量解释系统。
PMID:30572846,IF:3.288,BMC Cancer 2018 Dec 20;18(1)