【求助】关于ALK融合基因突变的检测
丁香园论坛
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各位大侠好，我是个实验的初学者。有个问题想求大家的帮助。我想检测一下石蜡标本中是否存在ALK融合基因的表达。ALK基因位于2p23,好像有6000多dp，ALK基因的多个外显子之间通常会有一些其他的基因融合其中从而会产生致瘤作用的融合蛋白。目前发现的可能会与ALK基因融合的其他基因有10来种，我想问一下怎样能够检测标本中是否存在这些融合基因的表达。我查过一些文献，有用FISH的，有用特异探针PCR的，有用免疫组化检测融合蛋白表达的，有用PCR直接测序法的....但FISH是不是只能检测已知的单个突变？免疫组化是不是特异性不强（即使是特异性较强的是不是也只能检测到一种融合突变）？那么PCR直接测序呢？
哪位大侠能不能帮我设计一下怎么能检测到已知和未知的ALK基因的融合突变？要用怎样的方法？各个方法的优缺点是什么？
谢谢大家了！原谅我的无知吧！我只是个初学者而已...
哪位大侠能不能帮我设计一下怎么能检测到已知和未知的ALK基因的融合突变？要用怎样的方法？各个方法的优缺点是什么？
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做测序吧，最准确，QQ 24289096
sunnyhaipo wrote:
各位大侠好，我是个实验的初学者。有个问题想求大家的帮助。我想检测一下石蜡标本中是否存在ALK融合基因的表达。ALK基因位于2p23,好像有6000多dp，ALK基因的多个外显子之间通常会有一些其他的基因融合其中从而会产生致瘤作用的融合蛋白。目前发现的可能会与ALK基因融合的其他基因有10来种，我想问一下怎样能够检测标本中是否存在这些融合基因的表达。我查过一些文献，有用FISH的，有用特异探针PCR的，有用免疫组化检测融合蛋白表达的，有用PCR直接测序法的....但FISH是不是只能检测已知的单个突变？免疫组化是不是特异性不强（即使是特异性较强的是不是也只能检测到一种融合突变）？那么PCR直接测序呢？
哪位大侠能不能帮我设计一下怎么能检测到已知和未知的ALK基因的融合突变？要用怎样的方法？各个方法的优缺点是什么？
谢谢大家了！原谅我的无知吧！我只是个初学者而已...
http://www.cellsignaling.com.cn/compaign/cancer-symbol
可以做FISH的。有ALK双探和ALK-EML4三探的，两种探针。ALK-EML4三探是目前市场上独有的，可以检测ALK-EML4融合蛋白。http://www.genediagnostic.com/search.asp?keyword=ALK&%E6%8F%90%E4%BA%A4=%E6%9F%A5%E6%89%BE 可以了解一下。或者有什么问题给我留站内信也行。
免疫组化可以检测，CST有专门的抗体
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