p-smad2蛋白WB结果出问题求助

用的大鼠组织提的蛋白，雅酶的10%胶，电泳120V-90分钟，PVDF膜200mA-60min转膜，碧云天快速封闭液10min，TBST清洗8miundefined3，一抗用的CST家的，4度过夜。第二天TBST清洗1undefined3次后二抗2小时，发光之后的结果就是这样。内参结果也很惨。同时一个电泳槽的另一张胶上做的smad2和内参就比这个好很多，虽然条带也浅但是好歹能看到。请教一下我的实验步骤是不是有问题才会这样。