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科研学霸天团,48小时有问必答
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死活细胞染料在流式染色中如何应用?
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问
想用流式分巨噬细胞,需要怎么处理组织?
毛利小五郎的徒弟
可以从PBMC中通过阴选试剂盒分离较纯的、有活性的单核细胞。也可以用CD14、CD64和CD192作为人单核细胞的特异性标志物通过流式分选出单核细胞。原代人单核细胞可以在体外培养,需要注意的是,在血清或M-CSF存在的5天内,培养的单核细胞将开始分化为巨噬细胞。单核细胞以粘附和非粘附细胞的混合形式生长,粘附细胞的比例取决于培养基和刺激因子。除了原代单核细胞,人外周血单核细胞系THP-1也常用于对单
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问
为什么Annexin V/PI不分群?
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问
流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?
毛利小五郎的徒弟
信号检测时,每一个细胞通过激光,机器的探头都会检测到一个荧光信号,在内部产生一个电脉冲信号(波),这个信号机器记录为一个峰值,每一个峰值都有三个参数,高度(H),宽度(W)和曲线下面积(A),H 和W都是直接测出的,而A是根据机器的设置就算得出。这三个参数都可以作为流式细胞仪结果图的坐标。比如PI(FL-2,老式的机器用这个来表示荧光通道的数目,一般是1-4)的信号,既可以用PI-H来作图,也可以
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问
免疫组化的抗原修复方式如何选择
毛利小五郎的徒弟
第一种:细胞质抗原修复绝大多数细胞质抗原不做任何修复,一般也能获得相对稳定的染色结果。但采取一些抗原修复方法,可以是抗原决定簇释放的更加充分,进一步提高结果的可靠性和敏感性。所以我们一般采取的是强度适中,反应相对温和的抗原修复方法。推荐使用微波修复法。推荐的方法:微波加热修复法推荐的修复液:常用柠檬酸盐缓冲液(pH=6.0)第二种:细胞膜抗原修复绝大多数细胞膜抗原如果不做任何修复,它的显色结果相对
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问
兔子冠状动脉
毛利小五郎的徒弟
给你推荐一篇文章,文章里面写的很好
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免疫组化中腊没脱干净,片子还能用
小小小小小芳
免疫组化中腊没脱干净,片子不能用
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问
做流式消化染抗体后不固定,可以第二天上机吗?效果影响会很大吗?
毛利小五郎的徒弟
不可以你可以固定好隔一天上机,但是不可以不固定
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问
做免疫组化,不同组织怎么取材,才能有代表性?
毛利小五郎的徒弟
给你推荐一篇文章,这篇文章里面很全
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问
免疫组化,组织冻融3次,会对结果造成什么影响
毛利小五郎的徒弟
免疫组化组织这样几次冻融,蛋白会变性,影响后续实验
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问
免疫组化,特征性如何,什么情况会出现假阳性?
毛利小五郎的徒弟
1. 消除病理性色素的影响: 当所检动物由于出血等原因造成吞噬含铁血黄素细胞增多时,为防止其与 DAB 显色呈现的黄褐色发生混淆,优先选用AEC显色剂。组织固定时间过长时,切片中容易产生福尔马林色素颗粒,影响结果观察,取材时应充分用流水冲洗,以消除影响。 切片制作不当引起的非特异性着色 在严重变性、坏死及炎性病灶处,在胶原纤维和结缔组织部位,在切片裱贴不平、折皱处以及组织边缘部位常会出现非特异
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问
免疫组化,一般切多少张片子,组织没有固定,冻融过,还能用吗?
毛利小五郎的徒弟
10-15个吧 ,没有固定冻融过最好不用了
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问
免疫组化,是否能够定量,怎么实现?
毛利小五郎的徒弟
可以的,先把免疫组化做了然后 用imageJ 分析
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问
心脏导管取血,经过大的血管怎么避免血管内皮损伤?
毛利小五郎的徒弟
操作轻柔,减少与内壁的摩擦。多加练习
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问
流式细胞检测什么时候需要去黏连?什么时候用fsc的信号去黏连,什么时候用荧光信号去黏连?
毛利小五郎的徒弟
在流式检测中,我们需要进行单细胞分析,有时样品中会混有两个或多个细胞的聚集体,这个时候需要去粘连
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问
检测胞内蛋白的表达水平用WB和流式细胞仪的区别是什么?
毛利小五郎的徒弟
WB是金标准,流式可以检测细胞膜和细胞内蛋白
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问
流式细胞仪可以测定悬浮细胞的数量吗?
juyue2010
可以的,直接进行细胞计数更便捷
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问
AnnexinV 检测细胞凋亡,流式结果图怎么看?
毛利小五郎的徒弟
在二维散点图上,PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞,annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞,而双染是凋亡中期的。需要在散点图上先画出4个象限,位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂,在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。
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问
除了熟练操作之外,还有什么方式能节约试验试剂,提高试剂使用率。
juyue2010
合理的实验设计,最少试验次数拿到结果。
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问
同一批小鼠细胞,可以用不同品牌的抗体一起孵育吗,会不会有排斥的情况?
毛利小五郎的徒弟
不要一起孵育,可以用剥离Buffer处理后再加另外一种抗体,在同一张膜上显色,配方园子里有;多抗是有可能有多条带的,和它是多克隆抗体有关,特异性差,会有交叉反应。
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