免疫组化的抗原修复方式如何选择

第一种：细胞质抗原修复

绝大多数细胞质抗原不做任何修复，一般也能获得相对稳定的染色结果。但采取一些抗原修复方法，可以是抗原决定簇释放的更加充分，进一步提高结果的可靠性和敏感性。所以我们一般采取的是强度适中，反应相对温和的抗原修复方法。推荐使用微波修复法。

推荐的方法：微波加热修复法

推荐的修复液：常用柠檬酸盐缓冲液（pH=6.0）

第二种：细胞膜抗原修复

绝大多数细胞膜抗原如果不做任何修复，它的显色结果相对于细胞质抗原要微弱一些。主要是因为他的位置靠外，容易和固定液的甲醛发生交联反应，无论是形成醛键还是羧甲基，都会造成蛋白构象的改变，遮蔽抗原决定簇与抗体连接。所以在细胞膜抗原修复的过程中，这个修复强度要稍微大一些，我们可以选择微波加热或者高压修复（如果微波修复效果不好可以选择）。如果是在实验室做实验，保守的选择微波加热修复，不过，对于时间和温度的控制要稍微加长，温度也可以略微高一些。

推荐的方法：微波加热修复法

推荐的修复液：柠檬酸盐缓冲液（pH=6.0）或 EDTA（pH=8.0 或 9.0），通常EDTA缓冲液的修复效果要优于柠檬酸盐缓冲液，国外很多实验室倾向于应用 DTA（pH=8.0 或 9.0）来修复。
第三种：细胞核抗原修复

细胞核抗原处在细胞的最核心位置，它的修复难度要大于细胞质抗原和细胞膜抗原。几乎所有的的细胞核抗原需要应用高压 120 ℃ 热修复才可以达到理想的效果，使用其他方法都很难见到不错的效果。由于高压热修复的强度要大一些，本身容易脱片，所以我们在实验的时候要做好切片的固定，这个有很多方法可以实现，比如烤片的时间控制、添加一些切片的粘合剂等等，大家结合自己的实验来安排。关于修复液的选择，如果目的抗原真的很难修复，可以选择 pH=8.0 或 9.0 的 EDTA 缓冲液。有文献描述说pH的大小与抗原修复效果成正比，

推荐的方法：高压热修复法

推荐的修复液：柠檬酸盐缓冲液（pH=6.0）或 EDTA（pH=8.0 或 9.0）
第四种：其它特殊类型抗原修复

免疫组化中一些特殊类型的修复，都是一些经验性的总结，比如 CD4/CD8/CD25/CD1a 需先用 3% H₂O₂ 浸泡 8 min，后用蒸馏水冲洗两次，再用高压热修复法进行修复。其染色结果就非常理想，反之阳性信号减少，阳性细胞也变少了。还有一些抗原修复以后反而假阴性大大增加。