一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒的实验步骤细节？

1、 石蜡切片脱蜡至水：依次将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min--无水乙醇Ⅰ3min-无水乙醇Ⅱ3min-90%酒精3min-80%酒精3min--70%酒精3min蒸馏水洗。

2、 Proteinase K消化：按1:9的比例，用PBS作为稀释液稀释Proteinase K原液，使其终浓度为20ug/mL。每个样本滴加100ul的Proteinase K工作液，使其被完全覆盖，37℃孵育20min。用PBS溶液浸润清洗样本3次，每次5min。

3、 标记：在冰上解冻TDT Enzyme和FITC-12Dutp Labeling Mix，并按照TDT Enzyme和FITC-12Dutp Labeling Mix=5:45的比例混合足够用于所有实验的标记孵育缓冲液。然后在每份组织样本上加入50ul TDT孵育缓冲液，37℃孵育1h。立即用PBS润洗样本，清洗4次，每次5min。

4、 细胞核复染：在黑暗中向组织样本上滴加DAPI染色液，室温放置5min。

5、 封片:细胞核复染完后，用PBS清洗组织样本3次，每次5min，然后轻轻去掉多余液体，滴加抗荧光淬灭封片剂封片。