bqq147
我在进行th17诱导分化实验,发现诱导不出来,流式上机感觉细胞好像没有激活的样子,我采用BD的CD3e抗体以5ug/ml进行包板,CD28也是5ug/ ml添加进培养液中,请问包板过程需要注意些什么?对细胞培养板有要求吗?我们买的甄记96孔u型板
是TTT
包板前细胞需要清洗干净,按照抗体说明书推荐剂量进行包板,第一次坐可以做一个高浓度,一个低浓度,诱导前需要加诱导因子,诱导成功的关键在于细胞状态要好
FrEShAIFE
一般需要在37度恒温培养箱中包被两个小时,包被好之后吸取液体,然后再进行细胞种板。细胞培养板来说,没有特殊要求(一般的培养板都会有抗体的附着点)。在加入CD3,CD28之后,你是否有加入相应的细胞因子进行刺激呢?比如诱导th2方向,需要添加IL4进行刺激。同时,培养淋巴细胞最好还是要加入IL2,保证细胞活性。
bqq147
有的,我买的peprotech的50ng/ml IL6和4ng/ ml TGFβ,我的也是在37°培养箱中包被2小时,然后吸弃液体,用1640洗两遍,但是我看流式图上完全没有分化的样子,目前不确定问题出在激活那一步还是诱导这一步😭
loveliufudan
在进行包板过程时,需要注意以下几点:
充分洗涤酶解过的包板:在使用新的包板之前,需要充分洗涤酶解过的包板,以去除任何可能存在的残留物质,防止对实验产生影响。
确保包板浓度正确:包板浓度过高或过低都会影响细胞的激活,一般建议使用厂家推荐的浓度。在使用时,可以根据实验需要进行优化和调整。
培养板质量问题:细胞培养板的质量也可能影响细胞的激活和诱导分化。建议使用无菌、无毒、无蛋白质吸附的高质量细胞培养板,并在使用前进行灭菌处理。
培养条件:在进行包板实验时,需要确保细胞处于适宜的培养条件下。比如,细胞需要在恒温、恒湿、含有适宜气氛的培养箱内培养,以保证最佳生长和活性状态。
此外,对于Th17细胞的诱导分化实验,还需要注意以下几点:
需要添加适当的细胞因子:Th17细胞的诱导分化需要适当的细胞因子,比如IL-6、TGF-β等。在进行实验时,需要根据实验设计和细胞类型添加适当的细胞因子。
合理的细胞密度:细胞密度对于Th17细胞的诱导分化也非常重要。一般建议细胞密度控制在1-2 x 10^6/mL左右。
注意细胞的净化和纯化:在进行Th17细胞的诱导分化实验前,需要对细胞进行充分的净化和纯化,以去除任何可能影响实验结果的干扰物质。
土井挞克树
你诱导失败的原因考虑是抗体浓度不合适,我一般使用10ug/ml的抗体进行诱导
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