某一个抗体多次调整条件还是跑不出来，除了抗体本身的问题还可能是因为什么呢？

可能原因及解决策略：

1. 上样量较少,建议上到20ul-50ul看看;

2. 分离胶改为12-15%;

3. 提高一抗和二抗的浓度,建议提高1倍;

4. 如有可能改为ECL法显色;

5. 尽量使用分子量Marker来标记目的条带的正确位置.

可能原因；1. TBST是否配制有问题。你是否在配TBST的时候tween 20的加入量太多。再确认一下。配好的TBST放在冰箱中，每次用的时候保证TBST都是冷的，这样对抗体有好处。2. 抗体过夜保存问题。建议在加入1抗之后先在室温下轻摇1 h，然后再放入4度冰箱过夜。第二天拿出后先在室温下轻摇0.5 h再洗膜。3. 显β-actin既然没有问题，显影与定影就应该是没有问题的。4. 还是有可能你的蛋白丰度不高。下次提取蛋白用RIPA buffer，同时用6倍loading buffer，加大上样的蛋白量。

可能是目的蛋白表达量低，此时应提高上样量；也可能是抗体稀释倍数过大，此时应减小抗体的稀释倍数。