wb如何才能把内参蛋白条带跑直？

1.分离好蛋白上清，在加Loading buffer，ddH2O前药先把金属浴仪器打开，使其尽快达到预定温度。然后快速于每个蛋白样品中加入LB和水。这样可防止蛋白的继续降解。

2.蛋白上样时，样品要混匀，特别是做CO-IP实验蛋白样品中含珠子的一定要充分混匀

3.药物或其他外界因素：使用影响围观蛋白的药物作用细胞，如长春新碱、紫杉醇等不要用tubulin蛋白；在做缺氧相关实验时不要用GAPDH；有些药物导致细胞生长发生改变时尽量避免使用actin。

（1）抗体：一抗用过3次往后就不要用了，直接换新的。

（2）转膜时（湿法或半干转法），特别是半干转法，务必保证上下层滤纸充分浸泡在转膜液中，使之达到饱和。

（3）上样时要保证各组蛋白浓度一致，同体积或同质量。

要跑出完美的内参条带，可以注意以下几点

1.小心上样，避免加到槽外，上样时候保证各组蛋白浓度一致，且样品要混匀

2.转膜时充分浸泡转膜液，充分驱赶气泡

3.及时更换抗体