流式细胞术单细胞悬液制备如何获得更明显的分群？

样本处理过程中，尽量保持细胞的活性，如果有酶消化过程，需要摸索一下酶的使用类型和处理时间，尽量减少对细胞表面蛋白抗原的影响，如果处理过程中细胞死亡比较多，可以用上死活染料排除死细胞的影响。当然，有一些指标本身表达就是不分群的，所以需要对自己检测的抗原要有所了解

T细胞染色要看T细胞的富集程度，例如淋巴器官中，若不分群，主要考虑细胞量过大抗体量不足；若TIL或者其他组织中来源T细胞，还需要考虑细胞分离不好、T细胞丰度较低的因素，建议去除实质细胞背景，加染白细胞标志CD45，圈出cd45阳性细胞群再分析。

看组织，如果是淋巴器官，脾脏，淋巴结等非常好做，研磨完了取适量（不能太多，影响染色）染色，上机器前用200目滤网过下。如果是肝脏。肺等就要胶原酶消化，percoll后检测了。

参考样本制备基本原则：1.使各种液体和悬浮细胞样本新鲜，尽快完成样本制备和检测；2.针对不同的细胞样本进行适当洗涤、酶消化或EDTA处理，以清除杂质，使粘附的细胞彼此分离而形成单细胞状态；3.对新鲜实体瘤组织可选用或联用酶消化法，机械打散法和化学分散法来获得足够数量的单细胞悬液；4.对石蜡包埋组织应先切成若干40-50μm厚的蜡片，经二甲苯脱蜡到水后，再用前述方法制备单细胞悬液；5.单细胞悬液的细胞数不应少于107个/ml。