请问特异性抗体常常出现不明的非目的条带是为什么呢？定量后的蛋白样为什么会出现有目的蛋白但无法敷育出内参的情况呢？

1，蛋白样品反复冻融，2非特异性蛋白结果抗体更多

非特异性条带可能是蛋白量较大，可以适当减少，也可能是蛋白不够新鲜，导致蛋白降解较多，可以更换新鲜蛋白。

无法孵育的原因可能是孵育时间不够，考虑温度的原因可以适当延长孵育时间。

杂带可能的原因及建议：

①目的蛋白存在多个修饰位点(磷酸化位点、糖基化位点等等)，本身可以出现多条带。查文献或生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，去除修蛋白饰后确定蛋白实际大小，这个需要一定的生物化学基础和生信分析能力。

②目的蛋白有其它剪切本，查阅文献或生物信息学分析其可能性。

③样本处理过程中目的蛋白发生降解，加入蛋白酶抑制剂；样本处理在冰上操作。

④上样量过高，过于敏感，适当减少上样量。

⑤一抗特异性不高，重新选择或制备高特异性的抗体。

⑥一抗不纯，纯化抗体。

⑦一抗或者二抗浓度偏高，适当降低抗体浓度。

是不是是小分子量Marker跑走了，增加胶浓度或减少电泳时间试试看

因为抗体的抗原表位可能会识别非特异的位点，所以会出现非特异条带。第二个问题，可能是你的蛋白样降解了，因为目的蛋白量大，还能出条带,但是内参已经不能出了。还有就是你内参的抗体坏没坏？建议换个内参试试。