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科研学霸天团,48小时有问必答
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求助|纯化后蛋白断开了
秋秋欣欣
可以减少离子柱与蛋白的结合时间
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问
有用abclonal的fat4抗体wb跑出来的大神嘛
Eason老歌迷
我跑出来过。这不是abclonal的多克隆抗体吗,而且fat4它好像是460kda,比较大,很难跑,我当时弄了好久,增加了转膜时间和电流才跑出来。
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问
WB结果
bamboopiggy
marker没问题,所以胶应该问题,出现这个样子,感觉就是你蛋白浓度太大了。
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问
用患者手术组织用于研究复杂么?
Eason老歌迷
不复杂,直接切下来切成小块,然后液氮冷冻即可,用的时候取出来,可以跑wb,qpcr,免疫组化等实验。
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问
WB检测LC3和p62均下调,但免疫荧光定量分析Lamp1也明显下降
balalaLy
试一下用rapamycin和CQ分别激活或者阻断自噬流看看结果能不能分析得通。
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问
WB检测LC3和p62均下调,但免疫荧光定量分析Lamp1也明早下降
bamboopiggy
p62降低,LC3 II/I升高一般表示自噬增高,你看看的LC3是I高还是II高?要看二者的比值。
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问
求助:WB转膜(0.45)后MARKER变淡很多
dxy_ql0su1t7
分子量大的蛋白和marker需要转时间更长才能到膜上,0.22的膜孔小,适合小分子蛋白转膜,如果有大分子和小分子同时转膜建议分开转
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问
wb内参无条带
哎呀呀呀呀哎
抗体用的对吗?一抗为啥抗鼠呢,是不是应该用抗β-actin的抗体,如果抗体用的没错,建议你换个抗体试试,抗体效果好不好在很大程度上影响实验结果
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问
far western blot的marker跑出来只有一条条带怎么回事啊?
dxy_ql0su1t7
上样的样本是否经过反复冻融?是否有降解?可能需要新的样本来重复实验
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问
慢病毒转染和腺病毒转染有什么区别?
哎呀呀呀呀哎
1.慢病毒需要vector+包装系统2.adv包装病毒基因组游离于宿主基因组,瞬时表达慢病毒基因组可以整合到宿主基因组上,可长时间稳定表达外源gene3.慢病毒高免疫原性,腺病毒低免疫原性
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问
蛋白免疫印迹实验目标蛋白和说明书上的分子量差异很大怎么办?
dxy_ql0su1t7
可能有多个转录本,如果多次跑出来的都是一个分子量的话建议按照实际操作出来的分子量为准
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问
elisa结果不准,克隆筛选的阳性率提高
whilt-shirt
有可能是操作的原因,建议重新操作试试
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问
救救孩子吧!WB求助
申东熙老伯
背景脏很大可能是你封闭没封闭好,建议用5%新配的牛奶来封闭。划痕应该是封闭前划到了。
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问
WB 目的蛋白曝不出来
申东熙老伯
目的蛋白没加样的孔有条带可能是你跑电泳的时候样品漏到两边的孔了,电泳的时候就可以注意一下两边没加样的孔有没有溴酚蓝。
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问
蛋白表达
bamboopiggy
你有没有跟beads结合以后的?上清中有,并不代表bind下来的就多啊。你先看看beads能binding下来多少
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问
杆状病毒系统,SF9,蛋白表达,讨论区
秋秋欣欣
将至少3种不同体积的病毒上清稀释液按计划加入至50 mL的Sf9和Sf21昆虫细胞培养体系中。在0, 24, 48,及72小时时取出固定份数的标准化细胞培养基并对细胞密度、生存能力、及随时间的大小变化进行评估。之后通过免疫蛋白印迹分析最终确定最优的表达条件。
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问
lc3跑了3次只跑出一条带
努力的崽
我开始也只有一条条带,后面延长了电泳时间和转膜时间,就有两条了
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Ros阳性组浓度的选择问题
汤姆卜丽波
可以小增量做一个梯度选择最佳浓度
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问
求助,western
申东熙老伯
可以看出膜上应该是有条带的,机器是不是之前有人用得很久,看起来应该是机器有问题没把条带发出来。
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问
用GFP-trap做IP时负对照能用IgG么?还是只能用空GFP 的样品,如果没有空GFP的样品的话还能用什么做对照?
汤姆卜丽波
为了保证实验的准确性和可行性,最好用空GFP
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