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科研学霸天团，48小时有问必答

问从左到右依次为input(5ul)、IgG(10ul)、IP(10ul)组。请问大家这样的IgG可以用吗？

bamboopiggy

如果实在找不到别的IgG了，这个可以凑合用，因为你实际ip下来的东西，比igG的要多，能说明问题。

4 回答231 围观

问asc寡聚化实验总是有问题😭

bamboopiggy

将沉淀重悬于 50 μl CHAPS 缓冲液中，其中含有 4 mM 辛二酸二琥珀酰亚胺（溶解在 DMSO 中）。在室温下孵育 30 分钟以交联蛋白质。在 4 °C 下以 5,000 x g 离心 8 分钟，弃去上清液并将沉淀重悬于 30 μl 的 2x 蛋白上样缓冲液中。在 95°C 下加热样品 2 分钟。应该就可以

1 回答1091 围观

问wb条带特别细是什么原因？tlr4 肠蛋白1:1000

dxy_gwrp7ndq

你的问题是没有选对合适浓度的胶，一般使用的胶浓度为6%，8%，10%，12%和15%的胶，而不同浓度的胶对蛋白和指示剂的压缩效果不同，浓度越高，压缩的效果越好，指示剂和显影得到的目的蛋白的条带就越细；而胶的浓度越低，指示剂和蛋白就能跑的越分散，看起来就相对粗一点。

5 回答1003 围观

问预染marker是怎么操作的呀？请问

biotides001

各厂家都有说明书，可以参照说明书或者问师兄师姐

7 回答227 围观

问蛋白总是发成这样，为啥呢？

bqejjh123

可能是因为你的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的杂质含量太高了

6 回答183 围观

问为什么CO-IP实验后的IgG显影明显？

刹那芳华2333

发生了非特异性结合，可以换一下igG

3 回答270 围观

问SDS-PAGE跑胶这个是缓冲液的问题吗？

bqejjh123

要么胶的浓度有问题，不同浓度的胶适用的分子量大小不太一样，自己查查，要么电泳缓冲液有问题，重新配新的，还有点样量少一些。跑的时间在长点。祝顺利

7 回答261 围观

问coip的IgG组一定要一点都看不到吗？实验组比IgG组深很多可以吗？

刹那芳华2333

最好是看不到，要不然没有说服力

3 回答117 围观

问大家做coip实验IgG加多少ul啊？应该跟抗体加一样量吗？

天一湖医者

通常上样量为50ug/100ug。

6 回答1076 围观

问wb条带整个泳道都是黑的

bqejjh123

可能：1.凝胶不均匀冷却，中间冷却不好; 电泳系统温度偏高，这样容易形成混乱一片。2.可能是由于装置不合适，特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡，或者两边聚合不完全，也容易混乱。3.样品溶解不好。4.样品中含有不溶性颗粒。5.加样量过多。

8 回答1728 围观

问WB曝光后，膜一片白一片黑而且条带很浅是怎么回事？

bamboopiggy

估计是你的抗体不特异，所以条带浅，然后与黑的地方有非特异性结合。你可以试试增加抗体浓度，看条带会不会黑点。至于非特异性结合，你在确定条带可以以后，提高点洗膜液中tween的浓度就好

6 回答975 围观

问目的蛋白15KD左右，一直没跑出来，内参β-actin一直都有，转膜试过衡流220 40min，也试过20V 15min

小熊纯一郎

百分之15的胶，不用跑到底，15的条带位置分开就行，转膜用0.22微米的膜，转40分钟左右，跑胶时可以把那个机器泡冰水里，降低电泳液温度，转膜时转膜液预冷。增加蛋白上样量，增加一抗浓度，或者换别的品牌的一抗。我觉得主要问题在于一抗，我们实验室0.45的膜，0.22的膜，pvdf膜，nc膜，还有转膜时间少到40min或者多到2小时，是都可以将小分子跑出来的。我的第一建议是换一抗，或者加一抗浓度。

4 回答1282 围观

问跑胶的时候选择恒压还是恒流？

未来9

跑胶时要求是恒压,转膜时才是恒流

5 回答348 围观

问请问电泳时为什么会跑成这样，谢谢

飞天幻雪

胶配的有问题。正常情况下不会出现弥散这么严重的，如果还是这样建议所有试剂都用新的

3 回答239 围观

问请问链霉菌中做Coip如何保证蛋白活力？

bamboopiggy

做好预实验，尤其是破菌壁时注意低温。可以先按照梯度条件裂了菌，跑个wb看看，然后再进一步做ip

3 回答85 围观

问取组织样品做WB需要灌流吗？？

未来9

需不需要什么灌流是根据你们实验安排吧和做WB没关系

4 回答147 围观

问WB重复不出相同结果是怎么回事？

未来9

问题出在每一步都有一定的可能性，比如电泳，转膜，敷抗体，显色等等。但据我所知，WB 最关键的还是转膜和敷抗体步骤，可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。

4 回答267 围观

问在做印迹实验多次出现信号低的情况怎么解决？

未来9

可能的原因及建议：①你所检测的样本中不表达目的蛋白，选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性，同时查阅文献。②检测样本低表达目的蛋白，提高上样量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。③转移不完全或过转移，可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头；适当调整转膜的时间和电流。④抗体不能识别测试种属的相关蛋白，购买抗体前应当认真阅读抗体说明书，确定其是否能够交

4 回答61 围观

问做wb实验时怎么保证蛋白不被降解

未来9

1、样本制备过程中尽量保持低温,避免蛋白变性、降解；2、加入PMSF，抑制蛋白酶活性；

4 回答192 围观

问wb实验，一抗二抗怎么选择节约成本，还能得到好的实验结果?

bamboopiggy

一抗可以选大公司的，然后买一抗稀释液，因为里面一般带着防腐剂，可以多用几次。二抗，随便哪个公司都可以。也用一抗稀释液来配就好。

3 回答277 围观

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