monior1
求救!
提了组织和细胞的蛋白跑β-actin,电泳浓缩胶80v跑到分离胶改为120v,转膜采用湿转,80v转50min,maker转上了,封闭2h,一抗抗鼠敷育过夜,tbst洗膜4次,每次5min,二抗抗鼠敷育1h,后续一直没有条带,求助各位大神,做了好几次了,还是内参都跑不出来
哎呀呀呀呀哎
抗体用的对吗?一抗为啥抗鼠呢,是不是应该用抗β-actin的抗体,
如果抗体用的没错,建议你换个抗体试试,抗体效果好不好在很大程度上影响实验结果
monior1
不好意思,我表述错了😂,用的一抗是碧云天的小鼠actin单抗,抗体是今年买的,几个月前师姐还跑出来过😭
申东熙老伯
marker是很容易能转过去的,转膜的话80V50min时间段电压低 建议增大电压延长转膜时间。
monior1
非常感谢您的建议,但是我已经用丽春红染过膜了,显示是有蛋白的😭,但是没有条带
whilt-shirt
有可能是转膜时间不够,建议加大时间至1.5h
monior1
非常感谢,但是我用丽春红染膜的结果显示组织显示出actin蛋白,但是最后曝光没有条带😭
bamboopiggy
actin没跑出来,别的蛋白跑出来了么?
你最好借个别人的抗体,试试,感觉是抗体的问题,一般情况下,即使内参不齐,也应该能跑出来。
monior1
因为刚开始做,所以只做了个actin验证体系,结果actin没跑出来
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