wb内参无条带
monior1
求救！
提了组织和细胞的蛋白跑β-actin，电泳浓缩胶80v跑到分离胶改为120v，转膜采用湿转，80v转50min，maker转上了，封闭2h，一抗抗鼠敷育过夜，tbst洗膜4次，每次5min，二抗抗鼠敷育1h，后续一直没有条带，求助各位大神，做了好几次了，还是内参都跑不出来
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4 个回答
哎呀呀呀呀哎
有帮助
抗体用的对吗？一抗为啥抗鼠呢，是不是应该用抗β-actin的抗体，
如果抗体用的没错，建议你换个抗体试试，抗体效果好不好在很大程度上影响实验结果
monior1
不好意思，我表述错了😂，用的一抗是碧云天的小鼠actin单抗，抗体是今年买的，几个月前师姐还跑出来过😭
申东熙老伯
有帮助
marker是很容易能转过去的，转膜的话80V50min时间段电压低 建议增大电压延长转膜时间。
monior1
非常感谢您的建议，但是我已经用丽春红染过膜了，显示是有蛋白的😭，但是没有条带
whilt-shirt
有帮助
有可能是转膜时间不够，建议加大时间至1.5h
monior1
非常感谢，但是我用丽春红染膜的结果显示组织显示出actin蛋白，但是最后曝光没有条带😭
bamboopiggy
有帮助
actin没跑出来，别的蛋白跑出来了么？
你最好借个别人的抗体，试试，感觉是抗体的问题，一般情况下，即使内参不齐，也应该能跑出来。
monior1
因为刚开始做，所以只做了个actin验证体系，结果actin没跑出来
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