丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

求助|纯化后蛋白断开了

相关实验:蛋白质的分离纯化

user-title

快点纯蛋白

用SP柱纯化蛋白后跑WB,分子量变小,发现蛋白可能是从中间断开了😭buffer用的是磷酸体系,求问各位大佬,怎么能避免断开,是和我用的buffer有关吗还是其他原因。

wx-share
分享

2 个回答

user-title

秋秋欣欣

有帮助

可以减少离子柱与蛋白的结合时间

user-title

快点纯蛋白user-title

您好,请问我可以通过加快上样流速来减少结合时间吗,还是其他别的操作呢?

user-title

Eason老歌迷

有帮助

因为Protein A柱的亲和配基在碱性条件下可能会从琼脂糖树脂上脱落断裂,所以一般会选择酸性的洗脱条件。一般会用的洗脱液有醋酸醋酸钠缓冲液,甘氨酸盐酸缓冲液,柠檬酸柠檬酸钠缓冲液等等。所以过proteina柱纯化蛋白会用到醋酸。

user-title

快点纯蛋白user-title

您好,目前我用离子柱尝试了磷酸体系和tris体系,结果都出现蛋白断裂的情况,但是之前用his柱就没有出现,请问出现这种情况是因为缓冲体系不合适吗?

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序