不连续的蔗糖密度梯度纯化外泌体离心后不分层

蔗糖密度梯度离心法是目前提取外泌体应用较多的方法，将细胞混合悬液或匀浆置于蔗糖介质的顶部，通过离心力的作用使细胞分层、分离，将外泌体从混杂物质中分离出来，然后使用滤膜进一步纯化（具体步骤见图）。蔗糖密度梯度离心法获取的外泌体纯度高，已作为药物载体用于临床试验。但前期准备工作繁琐，操作复杂耗时长，获得的外泌体数量却不多，而且可能会因梯度溶液高渗而导致亚细胞水分丢失，进而影响外泌体的生物学功能。这两篇关于提取纯化外泌体的中英文综述可以去详细阅读

[1] 外泌体分离和纯化方法研究进展 中华检验医学杂志, 2021,44(2) : 167-170

[2] Chen J, Li P, Zhang T, et al. Review on Strategiaes and Technologies for Exosome Isolation and Purification[J]. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 2022,9.

蔗糖梯度纯化法实验

实验材料：染色质粗品

试剂、试剂盒：聚碳酸酯离心管

仪器、耗材：Dounce 匀浆器

实验步骤：

1. 准备两种 18ml，浓度分别为 20% 和 60% 的蔗糖分离缓冲液（聚胺，水相或己二醇法的缓冲液），然后以线性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯离心管中，用梯度生成器形成沿离心管的密度梯度。

2. 将染色质粗品溶液轻轻地加到梯度上，用带吊桶式转头的 JS-13 ( Beckman Instruments ) 或 HB-4 ( Sorvall) 离心机在 2500 g 离心 15 分钟。

3. 3 ml —份轻轻地从梯度顶部取出样品，取少量用相差显微镜检查染色质的存在情况。

4. 收集含染色体的组分在 3000 g 离心 10 分钟。

5. 用大约为起始染色体粗品溶液体积 1/30 的分离缓冲液重悬浮染色体，继续下一步研究。