蛋白质冻干

低温的环境下蛋白的结构就很容易改变，可能会影响蛋白的功能，所以冻干是要加保护剂的，不同种类保护剂的功能会不太一样，那么我们先来看一下常用的冻干保护剂主要分为五大类：一、PH缓冲剂，蛋白稳定性受ph的影响较大，在选择缓冲液大ph时候，尽量不要接近蛋白质的等电点，以避免蛋白的聚集，tris、组氨酸、柠檬酸盐在冷冻干燥过程中会显示较小的ph变化，一般选择的buffr溶液的ph为5.8-8.0即可。二、填充剂，为了保证冻干品形成良好的结构防止产品坍塌，同时也为了增加配方的溶解性，所以填充剂必须是充分可溶并且是与蛋白是相容的，常用的填充剂是甘露醇、甘氨酸，牛血清白蛋白等。三、糖类，糖类是蛋白冻干过程中的赋形剂，因为糖类物质中含有较多的羟基，可以取代蛋白质与水之间的氢键来提供稳定作用，一般是双糖，如蔗糖和海藻糖。四、非离子表面活性剂，可以减少蛋白质的聚集，最常用的是吐温80。五、配体，有时候还会加一些配体来提高蛋白质的热力学稳定性。

进行蛋白质样品冻干时,为保护蛋白不易变性,我建议:

1. 可以选择在-20°C先预冷冻干机腔体及集气盘,不必在-80°C预冷。

2. 加入适量保护剂在冻干前先与蛋白质充分混合:

(1) 糖类:甘露醇、蔗糖等 10-100mM

(2) 纤维素:羟乙基纤维素 0.1-1%

(3) 蛋白:牛血清白蛋白 0.1-1%

3. 保护剂可保持蛋白质溶液处于玻璃态,避免冰晶损伤。

4. 冻干过程中要控制温升速率,防止过快升温导致蛋白变性。

5. 干燥周期结束后要及时收集样品,防止吸湿。

6. 可选用市售冻干保护剂产品,操作简便。

按上述要点加入合适保护剂,控制冻干过程,可以保持蛋白的活性。

可以加入10－50%甘油作为保护剂，然后放在-80°。