小胶质细胞

目前已有大量关于新生鼠皮层小胶质细胞培养方法的报道，主要通过培养混合胶质细胞，再采用“温和胰酶消化法”、“分层振荡法”、“密度梯度离心法”或“免疫磁珠分选技术”等提纯小胶质细胞。比如说我们经常使用的胰酶消化法，用0.25%胰酶+0.04%的EDTA消化后，进行传代。此方法获得的小胶质细胞，纯度可达90%-95%以上。

这个目前个人觉得最有效的分离方法，

目标：小胶质细胞（microglia）

材料：长到已经融合的小鼠脑胶质细胞混和培养（mixed glial culture）

Trypsin-EDTA solution (2.5% trypsin, 1 mM EDTA in HBSS; 25200-072)

Dulbecco’s modified Eagle medium-F-12 nutrient mixture (DMEM-F12; 31330-038)

方法：1，把DMEM和tyrpsin以1：3混和，作为消化液备用

2，PBS或者DMEM冲洗细胞一遍

3，加入以上的消化液，37度1小时以上

4，星形胶质细胞会像网一样整片脱离，而小胶质细胞还继续贴壁。

5，去除消化液连同星形胶质细胞。加入2.5％ 的Trypsin-EDTA继续消化5分钟左右

6，中止消化，猛力吹打，收集细胞，重新种到需要的培养体上即可。

注意点：1，DMEM-F12（ 31330-038，Gibico）含有对这个”温和消化法“非常关键的Ca离子。

2，分离得到的microglia最好不用原来给mixed glial culture的培养液，加入对 microglia生长非常重要的 macrophage colony-stimulating factor (M-CSF）会使细胞的寿命更长。