蛋白质的分离纯化

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-10-10

简介

从混合物当中分离纯化出所需要得目的蛋白质

原理

1.根据蛋白质的溶解度差异分离 —沉淀技术 2.根据蛋白质分子大小的差异分离 3.根据蛋白质的荷电差异分离 4.根据蛋白质与某些物质的吸附差异—吸附分离 5.利用生物分子专一性结合的特性—亲和层析

应用

生物化学研究

来源：丁香实验

操作方法

可逆沉淀：等电点沉淀、盐析法、有机溶剂沉淀不可逆沉淀：热变性沉淀、重金属盐沉淀、有机酸沉淀透

1、选材2、破碎3、混合物的分离

亲和层析实验（AC）

①准备层析柱，根据目标蛋白量和填料载量确定柱体积；② 准备样品，通过过滤或离心除去颗粒性物质，确保样品中不含干扰结合的物质，根据不同的亲和层析类型调整上样缓冲液 pH；③ 上样前用上样缓冲液平衡柱子或珠子，柱子需根据结合能力强弱确定上样流速；④ 孵育，对于亲和磁珠需将样品、抗体、珠子 4℃ 孵育一段时间后再进行洗脱；⑤洗脱，对于组蛋白标签蛋白采用咪唑或低 pH 盐溶液洗脱、对于 GST 融合蛋白采