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科研学霸天团,48小时有问必答
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PCR实验过程中易发生污染的原因有哪些?
dxyc42u
实验过程性枪头这些都要求无酶的,不要怕浪费枪头,严格执行无酶操作
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问
想请问小体系里,添加的酶体积比,还有体系里的终浓度有什么讲究吗?
dxyc42u
小体系的话一般多算几个孔最后做出来问题不大
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问
请问rct试验,可以用中药联合西药,对照另一个阳性西药
蓝莓小布丁
可以随机对照实验(rct)对不同组实施不同的药物干预以比较对照效果的不同。中西药联合用药是一种有效的治疗途径,可作为参考。
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问
感觉使用排枪加样会浪费很多样品或者试剂,大家是怎样解决这个问题的呢?
juyue2010
先配置比你总共需要的管数多2-3个样的mix,分装到8联排管管中,最后用排枪加。
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问
请问在加qPCR样的时候,反向吸排(先按到移液枪第二档再在加样时每次加到第一档)会更精确吗?有试过的小伙伴吗?
毛利小五郎的徒弟
会更加准确,反向吸排可以减少误差。
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问
溶解曲线出现杂峰的可能原因是什么?有哪些对应的解决办法?
dxyc42u
一般是出现引物二聚体,除此之外就要考虑及时更换试剂盒,
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问
在哪些情况下,PCR反应体系内的DNA浓度和纯度需要检测?
dxyc42u
一般做pcr都需要检测,这样才能保证要p的DNA质量,不然对结果影响大
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问
pcr快速核酸和普通核酸检测区别
huarenqiang5
常规 PCR 与快速检测的区别: 常规 PCR 检测在样本采集后需要进行核酸纯化再进行后续 PCR 反应,纯大概需要约 30 ~ 60 min。通常一块反应板中可够容纳 96 个独立的反应同时进行,(最多检测 91 个样本,外加 5 个质控样本),PCR 反应时间需要约 2 小时左右。而快速检测在样本采集后直接放入裂解液中释放核酸,通常无须进行核酸纯化可以直接进行 PCR 反应,使用快检
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问
请问退火温度如何选择?
huarenqiang5
55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。
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问
在PCR技术操作中,是否需要能量,需向溶液中加ATP吗?
丁香52
不需要,能量来自外界加热PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成
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问
出现非特异性扩增带怎么办?
dxyc42u
1 提高退火温度;2 如果你的非特异袋较大,那么减少延伸时间,用15-20S试试;3 换引物,找到更特异的引物;
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问
怎样检测引物是否合成的好?
dxyc42u
一般按如下条件检测a溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为pcr产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,mirna染料法检测时,溶解曲线的峰的位置可能在75度附件b琼脂糖电泳为明亮的一条带,条带一般在100bp以上,如果设计引物时pcr产物在100bp一下,需要仔细辨认是否为引物二聚体;引物二聚体的条带一般在50bp左右,条带弥散,暗。
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问
如果没有回收到目的片段,还需要作什么对照实验?
毛利小五郎的徒弟
没有回收到目的片段可以用已知片段做对照。
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问
qPCR方法验证误差和偏差
Dr_劉医生
非特异性误差和偏差可通过保证实验前后一致性和重复实验次数来减少。
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问
组织以及血液miRNA的提取和扩增跟mRNA的有什么区别?
Dr_劉医生
最大的区别就是二者的表达是相反的,miRNA 的高表达水平导致 mRNA 的低表达水平
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问
实验室的静电防护有简单有效的方法吗?
paj12345
不穿带绒,麻质的织物进实验室,静电是摩擦引起的;因此减少实验过程中的摩擦可以减少静电的产生,此外在秋冬季节,适当增加空气湿度,可吸收静电;金属可导电,可以在做完实验后定期接触金属制品导走身上的静电。
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问
关于PCR实验中酶的问题?
dxyc42u
单管震荡容易产生气泡不好加样。
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问
做小鼠组织剪尾提DNA进行pCR扩增测序的话,一般需要多少个循环呀。
毛利小五郎的徒弟
一般常规的PCR是反应30个循环。如果是定量实时PCR,40个循环。
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问
RT-PCR内参问题
dxyc42u
样本的浓度或者是质量有问题吗。
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问
rct,病例对照,回顾性队列的meta
Dr_劉医生
基线有分组的就是病例对照,没有的就是队列;RCT不能用nos量表,可以用Jadad量表;此外,不建议同时纳入回顾性研究和前瞻性的RCT放一起做meta,统计学的结果你解释不了。
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