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实验过程性枪头这些都要求无酶的,不要怕浪费枪头,严格执行无酶操作
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产生污染主要有以下4个原因:
①是PCR扩增产物的污染。这也是最常见的污染原因。PCR产物经反复多次的扩增,其复制量远远超过PCR的检测极限,所以即使是极微量的污染也足以造成实验结果假阳性。
②试剂的污染。在试剂的配制过程中,接触了污染的容器、移液器、枪头、溶液等物导致试剂被污染。
③待测样品被污染。放置样品的容器被污染或由于容器密封不严导致样品与外界接触被污染;其次在核酸提取过程中使用了被污染的移液器或枪头导致样品被污染;另外,某些样品中含有病毒,若弥散到空气中则有可能形成交叉污染。
④气溶胶污染。若气溶胶中包含病毒等污染物扩散至空气中极有可能造成PCR产物污染。气溶胶是由空气与液体表面摩擦而产生的,开盖、晃动反应管及污染加样器的反复吸样都可形成气溶胶从而导致交叉污染。
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PCR实验过程中,不同步骤建议用不同的移液器或者更换枪头,可防止污染;PCR纯化过程中,乙醇,酚类残留也会影响PCR结果
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除目的基因外的核酸污染,比如二聚体。
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