出现非特异性扩增带怎么办？

1 提高退火温度；

2 如果你的非特异袋较大,那么减少延伸时间,用15-20S试试；

3 换引物,找到更特异的引物；

一般非特异性条带主要与引物有关，一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.其对策有：①必要时重新设计引 物.②减低酶量或调换另一来源的酶.③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数.④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性,65℃左右退火与延伸).

排除引物设计是否合格，

提高退火温度，

调整引物用量，pcr中Mg离子，dNTP浓度