4915bp片段与pcDNA3.1载体一直连接不成功

各位老师，最近一直做双酶切质粒构建不成功，目的片段是通过PCR扩增后纯化获取，纯化产物的琼脂糖凝胶电泳结果显示与目的片段一致，但是最终获取的质粒进行双酶切鉴定只显示一条带，约在5kb左右，对最终获取的的质粒直接进行电泳检测显示两条带，进行单酶切显示的条带也在5kb，与双酶切的条带一致，请问各位老师这可能出现的问题是啥呀，我师姐跟我同步做，她的片段是一千三左右，双酶切显示连接上了，但是我的一直连不上，请各位老师指点！！！