从一个过表达的质粒上把过表达的那个片段用限制性核酸内切酶切下来，连接到另一个用同样限制性核酸内切酶切开的载体上为啥连接不上

有可能是一个平末端一个黏性末端，你可以先连一个T载体，再尝试连下一个载体

可能是酶切位点出了问题，检查下DNA片段是否完整

可能是两个核酸内切酶的切割末端不一致，重新更换切割位点一致的酶，创造出结合末端

有以下几个可能的原因：

1. 不兼容的限制酶切位点：连接的载体和过表达片段可能具有不同的限制酶切位点。确保使用的限制酶在两个DNA片段中都有可切割的位点，并且位点相互兼容。

2. 酶切条件不当：限制酶切反应的条件（如时间、温度、缓冲液）可能不适合特定的酶和DNA片段。确保在酶切反应中使用适当的条件，并根据限制酶的推荐说明进行操作。

3. 缺失或修饰的酶切位点：在一些情况下，DNA片段中的限制酶切位点可能被删除或修饰，导致无法进行酶切和连接。检查DNA片段的序列，确保限制酶切位点的完整性。

4. DNA片段损伤或降解：如果DNA片段在操作过程中受到损伤或降解，可能无法成功连接到新的载体上。确保DNA片段在操作过程中得到适当的处理和保护。

5. 缺乏连接条件：连接的过程可能需要一些特定的条件，如适当的连接缓冲液、连接酶和连接时间。确保遵循连接试剂的推荐条件，并在连接过程中采取适当的控制。