连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态致死的原因？

考虑转化条件设定不合适，先排除一下是否存在时间过长。

产物转化后感受态大肠杆菌死亡的原因可能有多种，包括连接体系的DNA浓度过高或过低、连接反应时间过长或过短、连接体系的酶和缓冲液质量不佳等等。针对您提供的实验细节，我建议您考虑以下几点改进：

调整连接体系的DNA浓度：连接体系的DNA浓度是影响连接产物转化的关键因素之一。您可以尝试调整基因和质粒的加入体积，以调整连接体系的DNA浓度。如果浓度过高可能导致细胞感受态死亡，如果浓度过低则可能导致连接效率低下。建议您可以尝试在不同的DNA浓度下进行连接反应，并测试连接产物的转化效率和存活率。

缩短连接反应时间：您所描述的连接反应时间约为10小时，这可能过长了。长时间的连接反应可能导致DNA的降解和损伤，从而降低连接产物的质量和稳定性。建议您可以尝试缩短连接反应时间，例如缩短至2-3小时，以提高连接产物的质量和稳定性。

调整酶和缓冲液的质量：连接酶和缓冲液的质量也可能影响连接产物的稳定性和转化效率。建议您使用高质量的连接酶和缓冲液，并确保它们没有过期或受到其他因素的污染。

尝试其他转化条件：如果您尝试了上述改进方法，仍然无法获得良好的转化效果，可以考虑尝试其他的转化条件，例如调整孵育时间和温度、转化后的细胞培养时间和温度等。

另外，如果您的对照组正常生长而连接体系的转化感受态死亡，可以排除细胞感受性或转化条件的问题，可能还需要考虑连接体系的质量和稳定性是否良好。

连接体系按照t4的说明书，一般37度半小时差不多了。