Tag1酶酶切后失败的原因？

酶切失败的原因有哪些呢：

1.甘油浓度过高：甘油浓度过高会导致星活性。星活性是指在非理想的条件下，内切酶切割与识别位点相似但不完全相同的序列。由于酶一般保存在甘油里，所以多加酶的同时会导致体系内甘油浓度变高，从而导致星活性。

2.用于酶切的PCR产物或者质粒浓度过高：一般来说，在一个20μl的反应体系中，1μl的酶在1X 缓冲液终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA，如果是快切酶15分钟即可。但是如果用于酶切的PCR产物或者质粒浓度过高，会导致切不干净。

3.DNA序列发生甲基化：原核细胞为了保护自己，选择性地降解外源DNA，可保护个体免于外来DNA（如噬菌体）侵入的系统，主要由限制内切酶和甲基化酶组成的二元系统。