生化分析仪酶测试不准确的原因分析

互联网2015-01-05

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在<a target="_blank">生化</a>分析测量中，酶的测定比较复杂，要求条件较高，测试比较困难。一般<a target="_blank">生化</a>分析仪只要酶的测定准确，重复性好，其它项目的测定一般都会没有问题。现就<a target="_blank">生化分析仪</a>酶分析中常见的测试不准确、重复性差的几点原因进行分析，以供使用者和维修工程师参考。

生化分析仪酶的测定一般用动力学法进行测试，其原理是在酶反应的最适条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速度计算出酶活力的大小和代谢物的浓度。零级反应期，指反应速度与底物浓度的零次方成正比，也就是与底物浓度无关。在零级反应期期间整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度（ΔA/min）与被测物的活性或浓度成正比。计算方法有两种：

1）绝对法： 酶活力(U/L)＝ΔA×(反应液体积/样品体积)×(1000/消光系数) 2）相对法： (U/L或mmol/L)＝［ΔA(测定)/ΔA(标准)］×标准物的活力或浓度 　　因此，生化分析仪酶的测定与许多条件有关。条件的设置，如：波长（单波长、双波长）、温度、参数、测试方法，延迟和测试时间，吸液量等。另外还与厂家的试剂，样品的采集、保存有关，同时与及时进行质控，从一个样品进入另一个样品测试时及时清洗也有很大关系。 例如GPT的测试一般选择为：波长为340nm，测定时间为20秒，延迟时间为40秒，吸液量为350μl，温度设定为37℃，试剂空白可任意选择。 因此GPT的测试结果与以下几点有关： 1、340nm为波长低端，能量较低，同时340nm滤光片使用较多，易老化。所以波长漂移不准，半宽度变化都会影响测量的准确度和重复性。 2、动态法测试有延迟时间，测试时间要求。延迟时间在动态法中为预反应时间，测试时间在动态法中为测试的总时间。零级动力学法是针对特定时间段而言的，酶反应刚启动时反应比较复杂，杂反应较多，必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期，各试剂商对这两段时间有严格规定。所以动态法测试一般温度在37℃，延迟时间不少于15秒为好。 3、对于参数的输入应按试剂要求输入其给定值，一般试剂商在试剂盒说明书中给予说明。 4、反应温度。 5、测试空白要准确。 6、吸液量的大小直接影响交叉污染和测量的重复性，建议测试污染性大的物质试剂量应相应增加。一般应大于400μl，一般项目为500μl即可。 7、测试不准确、重复性差从操作上看主要有：仪器本身原因如比色杯中有气泡；光源灯老化；光源电压不稳；340nm滤光片性能变差，透射性变小；波长不准确等有关。一般检查液路接口是否松动漏气，更换光源灯泡和340nm滤光片即可解决。至于电路问题，加热元件损坏，温度不受控的问题只能由工程师解决。

总之酶的测定影响准确度的因素很多，只要认真操作，综合分析影响测定的各项因素，认真分析，酶测定的问题不难解决的。根据我们的经验只要试剂、样品准确，保存得当，样品预处理仔细，仪器经常维护、保养，认真操作，问题会自行解决。