试剂盒提取质粒后电泳一片弥散，无目的条带，这是哪个步骤出问题了？

感觉是你没有连接成功，平板上长的都是杂菌。你下次做个不加连接产物的阴性对照看看，如果和阴性对照长的差不多，那就是连接产物要么没有连接成功，要么没有转到大肠杆菌里去。

挑单克隆提质粒后可先进行菌落PCR，菌落Pcr阳性的克隆进一步进行双酶切鉴定，如果没有切除目的条带，大概率是空载，需要重新连接转化了。

如果是普通电泳，RNA污染量不大的话可能看不到，如果比较大的话会成弥散的条带，因为在电泳过程中会降解，如果提取的RNA质量较好，电泳过程没有降解掉的话，可能会有一条比较清晰的条带在目的条带的下方，因为RNA电泳比DNA跑的快正常操作实验中提取质粒应该出现2条条带，由于空间结构的差异，从上至下第一条为较为松散的DNA环状结构，第二条是环状DNA超螺旋结构，有时往往会存在第三条带（出现在松散环状质粒DNA条带上方），即为DNA开环结构（由于质粒提取过程中闭合环状DNA遭到破坏，环状结构打开变为直链DNA）。