用cDNA扩增一个基因,总是扩增出带有内含子的片段 ，怎么办

1. 任何一个时刻，提取的RNA里有尚未完全加工成熟的mRNA.
2. 不管是否去除gDNA污染，都无法改变事实。只有靠marker去寻找正确长度的片段克隆，才能有可能得到不含内含子的基因片段。
3. 注意灯下黑，如果测序引物位点离正向引物太短，正向引物可能不完整或有模糊碱基。

可能引物不特异，建议重新设计引物试试

可能这个基因的某一个亚型就是带有这个内含子片段。换句话说，在某种细胞中可能这个内含子不被识别出来，存在一个带有它的剪切拼接亚型。如果一定要p出来和数据库一样的序列，要么就换个细胞要么就基因合成，现在基因合成也不算贵。