为什么产生了非特异性条带?

1.可能你的引物不特异，所以产生了非特异条带。2.尝试提高一下 annealing temperature，会降低非特异条带的产生。

1.抗体浓度过高；降低一抗、二抗的浓度，可以分梯度进行。

2.一抗的特异性不足；使用单克隆抗体，单克隆位点的抗原表位是唯一的，多克隆位点的表位不唯一。

3.二抗的非特异性结合，不加一抗，其他操作不变，即可检测出二抗的非特异性的条带是否来自二抗的非特异性结合；此时需要重新选择二抗。

4.样品蛋白质上样量过大；降低上样量，可以分梯度进行。