质粒构建整个流程和软件

snapgene软件不错，简单易学，功能齐全

质粒构建整个流程是 分 切 接 转 筛，生化书上都有，就是先找目的片段，根据你的载体和酶切位点，设计pcr引物，然后连接，转化，涂板，挑单克隆，送测序。 一般用snapgene和vector NT的多。

目的基因的筛选与鉴定 获取目的基因 构建基因表达载体 软件用snapgene

待引物合成之后，我们用ddH2O将其稀释到100 μM作为母液，取一些稀释到10 μM做下一步实验了。

首先我们P出目的基因，这一步建议用高保真PCR酶。

按照下面的体系

引物设计软件如Primer 5或NCBI Primer-BLAST在线设计引物并合成后，配制PCR反应体系:将模板、引物、dNTP酶、反应缓冲液和ddH20按比例加入,加好后轻微瞬离，放入PCR仪中扩增目的片段，扩增后通过琼脂糖凝胶检测目的片段大小是否正确。质粒构建方式多样,常规的T4连接酶, T4连接酶可用于平末端也可用于粘性末端连接，但一般推荐适用黏性末端。

基本步骤：

设计引物加接头，扩增目的基因，连接到T载体上测序。

软件：Vector NTI