实验问答4,346,835 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问wb检测，需要多少外泌体，颗粒数？

Eason老歌迷

外泌体是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200 nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯状形态、双层膜结构。如果拿外泌体做wb，需要大概10的8次方个。

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问α淀粉酶抑制实验结果超过1是为什么？

Eason老歌迷

前两天刚看了一篇文章，阿卡波糖在一定浓度内对淀粉酶抑制作用良好。可以发给你看，做个参考。

1 回答94 围观

问葡聚糖包覆的氧化铁能被间充质干细胞摄取吗

Eason老歌迷

葡聚糖包覆的氧化铁能被间充质干细胞摄取。

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问HIF-1a蛋白WB结果求助

Eason老歌迷

Hif-α的表达受细胞内氧浓度的高度调控，在低氧状态下表达会增多。HIF-1α在常氧下（21%O2）也有表达，只要O2>5%，即很快被细胞内氧依赖性泛素蛋白酶降解途径所降解!

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问组蛋白ChIP-Seq后，如何设计ChIP-qPCR引物验证某个基因测序结果？

Eason老歌迷

上ucsc网站，可以在搜索框中输入基因名，然后点击go,会出现它的位置，以及对应的富集区域。我们可以看到有富集峰，则可以选择这段的序列设计引物了。如果是有peak信息且富集的程度非常强的话可以设计当成阳性对照，阴性对照找没有peak富集的地方。

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问双酶切鉴定实验有目的条带，但是底部也出现非特异性条带。

Eason老歌迷

可能是出现了非特异性酶切。是不是你的酶切时间过长，我试过最长切过8小时，有一些内切酶会出现这种情况了。是不是配的酶切体系当中，酶的体积超过了总体积的10%，过量的甘油会影响。

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问想用流式细胞术测凋亡，应该用双染法么？代理商给我推荐的BD的这种试剂盒。还请问流式细胞术测凋亡应该注意的tips是什么

balalaLy

操作的时候动作要轻柔，染色后尽快检测

2 回答145 围观

问如何对分光光度计的数据进行处理？还有一些实验上的细节性问题？有人能搭理一下我吗？

Eason老歌迷

测出标准的已知浓度值溶液对某一波长光的吸收率E，做出吸收率E与溶液浓度N的曲线．然后，对未知浓度溶液在同一波长光下，测出其吸收率，从曲线上就可以求出其浓度值，改变波长，可以重新做出对这一波长的吸收率E与溶液浓度N的曲线，再进行测量。

1 回答97 围观

问wb出现2个条带怎么回事？

bamboopiggy

可能是抗体不特异，可能是胶的浓度出现问题，也可能是buffer的问题，或者有的蛋白就是两条带，如果LC3B

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问转染microRNA minics失败

Miracle星

1.准备不足做细胞转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。2.细胞污染细胞污染也是造成细胞死亡，转染效率低下的一大原因。首先，转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到绝对无菌。分享一个小秘诀：将提完质粒后或者提的最后一步，用75％乙醇沉淀，这样就除菌了。3.质粒质量

4 回答162 围观

问RNA转染时所用培养基需要全新的吗

bamboopiggy

只要你的枪尖是高压灭菌过的，就没有问题。但是要用无血清的。

3 回答76 围观

问氧化铁纳米颗粒虽然粒径很小，但很难过0.22um的滤膜，大家有什么解决方案吗？

Eason老歌迷

虽然可能是粒径很小，但是考虑有没有吸附的作用?

1 回答52 围观

问组织片TUNEL染色后凋亡率计算

Eason老歌迷

可以用iamgeJ来计算。也可以人工来算，首先是选取5个高倍视野，找500个细胞来数凋亡数，然后比值。

2 回答330 围观

问RNA稳定放线菌素D实验，结果曲线在某一时间点忽然翘起的原因？

Eason老歌迷

放线菌素D抑制RNA合成，是不是在这个时间点实验条件抑制了它的作用

1 回答164 围观

问上周蛋白浓度要不要调一致？

秋秋欣欣

最好是调成一致，结果才能达到半定量

3 回答48 围观

问一种上皮细胞中剪切的caspase3和9丰度不够，如何避免蛋白降解？

Eason老歌迷

可以用0.22um的膜过滤啊，别的膜过滤还是会有细菌存在，0.22的可以达到无菌要求，这样样本因为细菌导致的蛋白降解就不会产生了。

1 回答71 围观

问分子量小于1万道尔顿的，使用什么蛋白marker?电泳条件是什么？

bamboopiggy

你去一些卖marker的官网上找，保证有小于10KD的marker可以用，建议你用15%的胶跑就可以

2 回答79 围观

问我做的是小鼠海马组织,4度生理盐水灌注,4%多聚甲醛灌注,沉糖.OCT包埋,-20度切片,但是细胞大部分有空洞

balalaLy

一般说速冻是把组织放进液氮中速冻，我试过，效果并不理想。有同学建议用防冻液可以很好地防止冰晶产生，不会有空洞。你可以试试。

2 回答118 围观

问所有WB实验都用总蛋白就可以完成吗？

balalaLy

大部分蛋白是只需要看总蛋白，有些蛋白失活、激活状态分别在不同的地方表达，就得看总蛋白和活化部分的比例，比如NF-kB需要看入核部分和胞浆部分。

3 回答119 围观

问顺铂带进SPF如何消毒

balalaLy

顺铂溶液本身是无菌处理过的吧，外包装酒精擦拭之后放入消毒后的铁饭盒或者用锡纸包裹，放入传递窗紫外消毒。

1 回答75 围观

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