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粪便潜血试验

·什么是粪便潜血试验? 粪便潜血试验(FOBT)是对粪便样品执行的测试,以检测正常颜色粪便中的潜血(即肉眼不可见的血液)。粪便潜血通常是上消化道或下消化道内部慢性出血(通常是间歇性出血)导致的。慢性出血并不改变粪便的颜色或产生可见的明亮的鲜血。因此,血液只能通过实验室测试粪便来发现。潜出血与其他形式的更快速的胃肠道出血的很多原因相同,比如直肠出血(直肠鲜血通道和/或血凝块)和黑粪症(由于上肠道出血比如溃疡导致的柏油样大 ...

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树突状细胞及其培养基

树突状细胞培养操作步骤准备补充剂将补充剂混合物在 15~25℃ 解冻。在无菌条件下用移液枪小心地将补充剂混合物混匀。然后,把补充剂混合物全部加到基础培养基中。盖上瓶子,轻轻混匀直到形成均一的混合物。DC生成培养基所附带的相应的细胞因子组合包含有成分A和B,它们都是以100X 的原液状态运输的。注意:此时不要将化合物B加入培养基中。DC基础培养基不带细胞因子,因此使用时必须另外自行添加。新鲜分离的单核 DC 细胞的传代对于新鲜分离自 ...

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定量PCR实验技术分享

1. 如果扩增曲线ct值比较靠后的话,32左右,一般有什么方法解决没有ct值比较靠后,对实验有一定的影响,因为经过那么多次的循环,酶的活性有可能有所下降,这时候扩增效率会有所改变(而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值)。因此最好能够把ct值往前移。解决办法可以将模板加以浓缩或者抽干之后用少量水去溶解。2. 为什么合成的引物做不加摸板的对照也能扩增出目的条带,而内参用同样体系就没有呢?引物被 ...

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定量PCR实验技术分享

1. 如果扩增曲线ct值比较靠后的话,32左右,一般有什么方法解决没有ct值比较靠后,对实验有一定的影响,因为经过那么多次的循环,酶的活性有可能有所下降,这时候扩增效率会有所改变(而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值)。因此最好能够把ct值往前移。解决办法可以将模板加以浓缩或者抽干之后用少量水去溶解。2. 为什么合成的引物做不加摸板的对照也能扩增出目的条带,而内参用同样体系就没有呢?引物被 ...

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QPCR常见问题及其分析

一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一般是10ng-500,如果cDNA,通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液,要根据目的基因的表达丰度 ...

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qPCR(RT-PCR)数据相对定量的分析方法与经验

qPCR的数据相对定量分析其实很简单。我做了很多的qPCR实验,也看了很多的资料,包括Nature protocol, AB官方的分析教程,MIQE,甚至包括一些商业化软件使用的教程及教程里面记述的原理。我在这里跟大家分享一下自己的经验,最常用,最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法,该法最最简单的说就是:首先将一次实验的所有基因Ct值整理好,之后用每一组样本自身的目的基因Ct值减去自身内参基因Ct值,得到的数就是△Ct ...

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基因表达之RT-PCR之我见

基因表达的定义:每当说到基因表达,我自己都觉得不知所云,是指RNA,还是蛋白?是指mRNA还是包括风头正旺的非编码RNA?mRNA还有不翻译的RNA呢。应该说转录水平指的是RNA水平,而蛋白应该叫翻译水平?我们这里就特指编码蛋白的mRNA的量的检测。方法:很多很多,我们常用的也就是RT-PCR和northern(实际上我也只知道他们,丢人啊),但是RNA酶保护分析在国外很常用,也有半定量的功能,一次性试剂盒还能以此 ...

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心型脂肪酸结合蛋白与急性脑梗死

缺血性脑血管病的发病率、病死率和致残率均很高,越来越受到研究人员的重视。目前,急性脑梗死的早期诊断主要依靠临床检查和神经影像学技术,但CT或MRI检查通常在数小时后才能显示病灶。通过检测血清神经元特异性烯醇酶(NSE)、S100蛋白(s100B)水平虽然可早期诊断,但同样也缺乏特异性和敏感性。近期的研究表明,脑梗死超早期可出现血清心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)水平增高,且敏感性和特异性较高,可作为早期诊断缺血性 ...

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七大武器 玩爽实验protocol 引爆究极小宇宙

许多同学都会遇到这么个问题,每当要进行一个从没有做过的实验时,总会抓狂,到哪找protocol呢,度娘似乎是万能,但是度娘总是返回一些乱七八糟,浪费时间的Protocol。想必,这一直是困大家的问题。好吧,师兄今天将传授你七种兵器,帮你你找到它。1. 查实验工具书比如《分子克隆指南》、《蛋白质技术手册》、《蛋白质-蛋白质相互作用》、《Using antibodies》、《动物细胞培养——基本技术指南》等等,这些参考书中都较为详细地介绍 ...

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制药行业白色念珠菌检测全套解决方案

白色念珠菌(Candidaalbicans)又名白假丝酵母菌(Saccharomycesalbicans)属假丝酵母菌属(Saccharomyces)。在SDA上培养2日后涂片镜检,呈革兰阳性(如图1),但着色不均,菌体呈卵圆形(2.5~4μm)、薄壁;而在玉米粉一吐温80培养基上培养3日后涂片,可见顶端圆形的厚壁抱子(如图2)。白色念珠菌以出芽方式繁殖,在适宜的培养基上有芽生孢子及假菌丝生长,在假菌丝间其末端形成厚膜孢 ...

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CRISPR技术分享

近年来,CRISPR技术掀起了基因组编辑的热潮。短短一年间,CRISPR技术已登上了数个知名榜单,包括Science的十大科学突破,Nature Methods的值得关注技术,以及Technology Review的十大突破技术。利用CRISPR技术发表的文章更是层出不穷。今天就和大家分享下CRISPR实验的主要步骤及需要考虑的因素。第一步,你要确定你做CRISPR的目的,即选一个CRISPR系统你要考虑清楚为什么 ...

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三层包装平板培养基在制药行业环境监测的应用

目前,国内正规的制药行业均依据《药品生产质量管理规范》(GMP)进行工厂管理,生产环境的要求及其严格。为了保证药品质量安全,GMP中对不同类型药品的生产环境洁净度都进行了限定,因此,生产环境监测就成为了把关药品生产安全的重要一环。最新版《药品生产质量管理规范》附录1:无菌药品中,第十一条指出:“应当对微生物进行动态监测,评估无菌生产的微生物状况。监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法(如棉签擦拭法和接触 ...

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病毒包装经验总结

在做病毒包装实验中,有科研工作者常遇到:用同样一个病毒载体系统进行病毒包装实验,为什么有人做的很好,次次成功,有人却是时常做不出来,稳定性很差,不是滴度低就是根本不出毒?从我们对不同载体系统病毒包装的多年经验总结,主要以下几个方面心得:第一,病毒包装的几个关键节点就是细胞因素、载体系统(尽量使用成熟的商业化载体系统)、构建重组的质粒正确与否、质粒抽提纯化情况、包装转染控制(24、48 小时的细胞及荧光状态判断)、目的基因 ...

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新问题 | 血细胞计数原理你真的懂吗?

细胞培养技术中,细胞计数是一项基本功,对于标准化培养条件以及需要精确定量的实验来说都非常关键。这里介绍使用血细胞计数器对细胞进行计数的经典方法以及中间一些需要注意的细节。制备细胞悬液:对于贴壁生长的细胞,我们需要首先使用胰酶消化的方法使细胞从培养皿表面脱落根据需要加入合适体积的培养基,将细胞进行中和及稀释,以得到均质的细胞悬液。要求尽可能将细胞吹打散开,不要残留任何细胞团准备血细胞计数器:使用70%乙醇将盖玻 ...

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慢病毒包装简要程序

以六孔板中的1孔为例,每个样品需要1×106个293FT细胞。1、取1.5 ml灭菌EP管,加入1.5 μg包装混合质粒和0.5 μg表达质粒以及250μl的无血清Opti MEM。轻柔混匀,室温孵育5 min。2、取1.5 ml灭菌EP管,取9μl 脂质体2000l溶于250 μl无血清Opti-MEM I培养基中。轻柔混匀,室温孵育5min。3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20 min。4、用胰酶消化并记数293FT细胞。用含血清的DMEM ...

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如何提高临床检验质量

随着生命科学的迅猛发展以及基因工程、分子克隆和基因芯片等一系列分子生物学技术应用的不断深入和完善,检验医学作为临床医学中的一门新兴学科完成了从临床实验医学中医学检验到检验医学的转变,也使检验科的工作定位和观念发生了变化。 检验医学为疾病的诊断、治疗、康复和预防提供实验室依据,临床检验质量对于检验医学的重要性不言而喻。3月13-14日,由易贸医药主办的2015(第六届)国际体外诊断产业高峰论坛在深圳成功举办,论坛有 ...

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循环肿瘤细胞――前景美好,广泛应用仍需期待

循环肿瘤细胞——前景美好,广泛应用仍需期待 天津市宝坻区人民医院检验科副主任技师 王彦平 传统的医学理论认为,肿瘤起源于局部,是由于局部组织或器官的细胞受到各种内外因素的影响,比如放射线、化学致癌物等刺激,而产生遗传特性的改变,也就是基因上的改变而发展为肿瘤细胞。然而现在越来越多的理论却支持肿瘤起源于全身。 在遗传学理论中,基因不总是稳定的,偶尔会发生突变。每个胚胎干细胞都具有发生基因突变的能力,而基因决定细胞的性质,突变后的细 ...

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Rockland Dr.Moncada 分享: 如何获得更漂亮的流式结果

1. 如何降低背景流式细胞实验优化过程中的一个关键步骤是试剂(抗体)的滴定。为了达到最佳效果,实验者必须确定抗原结合达到饱和所需抗体的最低量。这将帮助实验者提高荧光信号特异性和强度,同时尽量降低背景。如果需要同时使用多色时,滴定这一步骤也可以让实验者发现一抗和二抗之间意想不到的交叉反应。2. 如何选择对照Mouse IgG2a Isotype Control Fluorescein 010-0241千万记得设置与标记抗体同型的阴性对照, ...

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常用阳离子脂质

自20世纪70年代DNA重组技术诞生,以重组DNA技术为核心的现代生物技术产业蓬勃发展,已有十多个基因工程药物上市。以基因工程药物为主的各种基因工程产品和细胞工程产品陆续商品化。在基因治疗中,基因载体是外源基因得以进入受体细胞的关键,其中,阳离子脂质体目前被认为是靶向性好,副作用小,稳定性好和转染效率较高的理想载体。阳离子脂质体通常由一种阳离子脂质和一种中性辅助脂质在适当的条件下复合而成,阳离子脂质体转染效 ...

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脂肪乳中的蛋黄卵磷脂

与其他微粒给药系统相比,脂肪乳具有许多优点:主要辅料植物油和蛋黄卵磷脂对人体无毒,安全性好;可使用现有非胃肠道营养用脂肪乳生产线进行工业化大生产;能耐受高压蒸汽灭菌;载药量比脂质体高。脂肪乳粒径多在200-500nm之间,为亚微乳体系,药物溶解于油相,或处于磷脂壳膜层中。目前,已有包括脂溶性维生素在内的八个药物采用了脂肪乳载药技术。分别是丙泊酚、依托咪酯、前列地尔、氟比洛芬、地西泮、棕榈酸地塞米松、丁酸氯维地平以及脂 ...

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