质粒提取原理（别人的总结）碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 /25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液，是再自然不过的了。那么50 mM葡萄糖是干什么的呢？说起来不可思议，加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。因此， ...
看到论坛里还是有同学请教克隆的问题，因为在以前的实验室里也经常做克隆，就整理了自己的一点经验，发在这里，希望能抛砖引玉，大家踊跃来讨论。实验的过程和标准过程差不多，只不过有些改进，缩短了一些步骤的时长。实验室常讲的克隆，意思是将一段序列连接到细菌（一般是大肠杆菌）的DNA中，随着大肠杆菌的不断繁殖，而达到使目标序列无限复制的目的。明确概念后，要讲讲克隆在实验室中到底有什么作用。最常见的是：1.要测序的PCR产物条带 ...
我要扩增一种逆转录病毒（)的某段基因。将这段基因用RT-PCR方法扩出来后，再用pcDNA3.1转到Hela细胞中，观察它对细胞一些表达产物具有正向还是负相的调节作用。基因序列如下：1 atggaacaag ccccagaaga ccaagggcca cagagggagc cacacaatga atggacacta61 gagcttttag aggagcttaa gaatgaagct gttagacatt ttcctaggat ttggctccat121 ...
SNP(Single nucleotide polymorphism) 即单核苷酸多态性， 指的是由单个核苷酸—A,T,C或G的改变而引起的DNA序列的改变，造成染色体基因组的多样性。所以，SNP可导致人类疾病，如癌症、传染性疾病、自身免疫性疾病等，SNP是研究人类家族和动植物品系遗传变异的重要依据，因此被广泛用于群体遗传学研究和疾病相关基因的研究，在药物基因组学、诊断学和生物医学研究中起重要作用。 分类： 根据 SNP 所处的位置，可将 SNP 分为蛋 ...
实时荧光PCR作为新一代分子生物学研究工具，已成为分子诊断、临床检验以及基础生物医学研究的主流技术平台，广泛应用于传染病、肿瘤、遗传病、心血管等疾病的分子诊断。为使广大一线工作人员全面掌握该技术，本中心在连续举办四届荧光PCR研讨会并获广泛好评的基础上，再次携手国内外荧光PCR领域的知名专家，于2012年12月2-8日举办“第五届荧光PCR与分子诊断研讨会” 。本届研讨会将继续采用深受好评的技术讲座与现场实验相结 ...
过去的几年里人群中肥胖症患者的比例急剧升高。因此对脂肪细胞---脂肪组织的基本组成单位---功能的研究也不断升温。这其中大多数的研究通过从脂肪组织中提取少量的RNA来检测参与代谢调控的低丰度基因表达水平。就小量RNA的检测而言，与传统的RNA定量检测手段（如RNA印迹分析）相比，逆转录实时定量PCR(qRT-PCR)更为灵敏。实际上，这一技术足以定量单细胞的RNA水平。qRT-PCR应用的主要限制因素是结果的高不稳定 ...
PCR常见问题总结PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。一.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核 ...
N摘要：荧光条形码标记的单分子检测技术是一种全新的高通量检测基因表达谱、miRNA等分子的技术，其定量结果可与real-time PCR相媲美。由于它的高通量和高精确性填补了基因芯片和real-time PCR之间的技术空白，一经问世大受欢迎，其检测结果频频登载在nature、science、cell等顶级杂志上。NanoString公司研发的荧光条形码标记的单分子检测技术最早诞生于Leroy Hood博士创立的系统生 ...
In 1972, two groups, working independently, developed a new method to clone fragments of DNA using the enzyme terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT). Because the use of restriction enzymes for cloning purposes had not yet caught on, these two groups had developed their methodologies ...
Cleavage Efficiency Close to the Termini of PCR FragmentsWhen designing PCR experiments in which the synthesized DNA fragment is to be subsequently digested with a restricton endonuclease, it is very important to determine how many extra nucleotides should be added to the 5'-end of the PCR pr ...
我想作RT-PCR，扩一个长度为1352kb的基因，用pcDNA3.1作载体表达。我要得到cdna全长，不知道应该怎么设计引物和酶切位点。mrna序列如下CAGGCTCTGTGTTGGTTGGAGCGAGCATGTGGGTCTGCAGTACCCTGTGGCGGGTGCGAACCCCGCCCGGCAGTGGCGGGGGCCTGCTCCCAGCTTCTGGCTGTCACGGACCTGCCGCCTCCTCCT ...
我最近跑pcr,用我的模板第一次跑出来，可后来始终不见条带。我的目的片断序列如下：ORIGIN1 accgcctccc gcaaagactt caccccaaag ctggggcgca ccccttgcac gccaccctcc61 ccccagcctg cttcttgagt cccccgcatc ccaggaccct ctctcctctg ggaggccgat121 ctccctcgga cctgctggca atagcttcct atttaagaac acccca ...
各位尊敬的大师兄:以下序列是人类某整段基因组DNA转录起始点上游2826BP长度片段,老板要我PCR出转录起始点上游1500BP片段,需要设计引物,我才开始做,希望各位高手赐教.小师妹不慎感激!!!1 tgacagaagg agaccctgtc tcaaaaataa taagaataat aattaataat aataggccaa61 accaaatacc catcaccttc tgctgtgcct cccctttccc caataaatcc agtg ...
cDNA sequence: unknownGenomic sequence: unknownBlat alignment:Length of cDNA: 5799Start in cDNA: 0End in cDNA: 5799Mismatches: 0Gaps in genomic Seq: 0 (introns included)Gaps in cDNA: 0Exon1_1: 966 bp,Product size 1081Exon1_2: 966 bp,NO PRIMERS FOUND. Trying new parameters!!!Exon1 ...
tg tctgggtctt gcacaatgac119521 aatgggtccc tgtttttccc agaggctctt ttgttctgca gggattgaag acactccagt119581 cccacagtcc ccagctcccc tggggcaggg ttggcagaat ttcgacaaca catttttcca119641 ccctgactag gatgtgctcc tcatggcagc tgggaaccac tgtccaataa gggcctgggc ...
我的试验动物是猪，在网上查的HIF的基因不是全序列，对引物设计有影响吧，如果这样不能得到引物我该怎样办？我急用求高人指点LOCUS AY485675 569 bp mRNA linear MAM 23-DEC-2003DEFINITION Sus scrofa hypoxia-inducible factor 1 alpha mRNA, partial cds.ACCESSION AY485675VERSION AY485675.1 GI:40037189KEYWORDS .SOURCE ...
我设计的引物如下：上游引物加BamHI CGGGA TCCTGTCGCA CCAAATCGTA 73.3 62.6下游引物加 XbaIGCTCTA GACATATGCC ACCAGCAACT AACATG 70.4 65.6Two primers complementarity.Max complementarity in continuous: 4 bp, free energy= 0.20 Kcal/mol5'-GCTCTAGACATATGCCACCAGCAACTAACATG-3'||||3'-AT ...
LOCUS NM_017002 1524 bp mRNA linear ROD 28-OCT-2004DEFINITION Rattus norvegicus erythropoietin receptor (Epor), mRNA.ACCESSION NM_017002VERSION NM_017002.1 GI:8393318KEYWORDS .SOURCE Rattus norvegicus (Norway rat)ORGANISM Rattus norvegicusEukaryota; Meta ...
请大家帮我评价我设计的引物，设计数次，总是感觉不满意，所以恳请大家顶力相助，我先谢谢大家了。我要克隆一个基因的一部分，sense DNA序列如下，383bp－638bp是我要扩增的目的基因，上下游多扩增15个bp关系不大，请指教。ccggcccgcg ccccgcaggc cgcccgccgc ccgcgccgcc atgggagtgg agggctgcac61 caagtgcatc aagtacctgc tcttcgtctt caatttcgtc ...
全血基因组提取过程包括：1 、裂解红细胞并沉淀白细胞。2 、裂解白细胞及其细胞核。3 、盐析沉淀蛋白，分离基因组。4 、异丙醇沉淀脱盐并浓缩。5 、70%乙醇清洗，晾干并用TE缓冲液溶解。本试剂提取的基因组DNA长度大于20kb, 可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。一、 试剂盒组成 （本试剂盒提供的试剂组分, 至少可提取20份300ul全血样本的，每种组分均有足够的富余量）1． 红细胞裂解液：20ml/1瓶。 4. TE 缓冲液（DNA溶解液）：4ml/1瓶。2． 细胞 ...
