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【求助】IRES的长度

254774755 请问各位大侠:我的基因构建结果如下CMV目的基因IRES目的基因PolyA我要做上面基因的pcr鉴定,请问CMV,IRES,polyA碱基个数有人知道吗?freecell 那你得先问自己了: 你为何要把做这样的克隆?zhujoker 呵呵,引起Freecell版主亲自关注了。的确你问的问题有的不是很清楚,既然质粒是你自己构建的,那么当初你不是用PCR的方法将你上面所谓的目的基因P出来的在连接上去?如果你当 ...

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【求助】EGF等生长因子的转录和分泌是由什么控制?

webowner1985 如题。要是用一种药物处理细胞EGF分泌增多,请问参与促进EGF分泌的通路是什么呢?谢谢zongjieli82 Cheung,W.Y., Zhai,R., Kulke,M., Heist,R., Asomaning,K., Ma,C.,Wang,Z., Su,L., Christiani,D. and Liu,G.Epidermal Growth Factor A61G Gene Polymorphism, GastroesophagealReflux Disease, and Eso ...

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【求助】p38抑制剂SB203580的应用,急急急。。。

xiexia2008 请问下,我买的SB203580呈粉末状,去查了SIGMA上面的说明,-20度保存,不明白是直接连包装保存-20度还是需要我先配成工作母液在保存-20度,我过两星期才用这个抑制剂。谢谢回复。xiexia2008 希望有做过这方面的朋友指点一下doctormy xiexia2008 wrote:请问下,我买的SB203580呈粉末状,去查了SIGMA上面的说明,-20度保存,不明白是直接连包装保存-20度还是需 ...

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【求助】解释Taqman-based microRNA assays

505twd Taqman-based microRNA assays具体是什么实验方法?是什么时候出的?现在应该在哪里?要求什么实验条件啊?哪里可以做呢?拜托各位大侠了zhujoker 具体请参考下面这篇文章:Real-time quantification of microRNAs by stem–loop RT–PCR学习要自己慢慢看,什么都告诉你谁都可以做啊。freecell The basis of TaqMan® MicroRNA Assays is a target-sp ...

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【求助】细胞里有没有切割多聚蛋白的酶?

fallmonkey 有些病毒会编码这样的蛋白酶,将翻译出的一条长多聚肽链,切成有活性的2-3个蛋白,细胞里面有么有这样的酶或机制?hanmingyue 纤维切割蛋白(filament-severing protein)这类蛋白能够同已经存在的肌动蛋白纤维结合并将它一分为二。由于这种蛋白能够控制肌动蛋白丝的长度,因此大大降低细胞中的粘度。经这类蛋白作用产生的新末端能够作为生长点, 促使G-肌动蛋白的装配。另外, 切割蛋白可作为加帽 ...

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【求助】真诚请教哪位前辈用过NF-KB阻断剂PDTC

waterbottle_12 哪位前辈用过NF-KB阻断剂PDTC,我订购的PDTC药物马上要到了,听说PDTC要放在惰性气体里,现在不知道怎么存放,具体存放是怎么操作,及那我把药物配成溶液的时候怎么操作及配液的注意事项(是不是配液也要在惰性气体里操作?谢谢doctormy waterbottle_12 wrote:哪位前辈用过NF-KB阻断剂PDTC,我订购的PDTC药物马上要到了,听说PDTC要放在惰性气体里,现在不知 ...

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【求助】求《细胞凋亡》这本书

yy59410 希望有这书的站友给上传一下,真的很需要非常感谢!wk125 是英文版的那本吗,我有,如果是的话可以发到你邮箱里nickysong 你是要Humana Press出的Methods in Molecular Biology那个系列里的Apoptosis吗?if it is,just pm mekfk19840101 我也很需要 如果哪位有请发到我的邮箱 KFK19840101@163.com感激不尽yy59410 英文版的我有了,谢谢。我想要本中文的哪 ...

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【求助】成纤维细胞的生长周期

liupeizc 请问哪位高手知道成纤维细胞的生长周期啊,更确切的是血管外膜成纤维细胞生长周期,谢谢!zhujoker 估计都没人做过,你如果需要观察其生物学功能,就自己做一次,也算原创了啊!freecell 这里有:http://www.currentprotocols.com/protocol/cb0201本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:sh ...

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【求助】RAW264.7诱导破骨细胞

luming10 求助,本人用RAW264.7细胞诱导破骨细胞一直失败,96孔板,2000个细胞/孔,RANKL50ng/ml,M-CSF25ng/ml,5到6天后TRAP染色一直没有看到理想的结果,各位前辈有做过这个实验的请传授经验,培养RAW264.7细胞的时候是否有些特别注意事项,如何使RAW264.7的状态达到最佳?以及关于TRAP染色有什么需要注意的,多谢xxmchappyniu 同问,最近一个同事也要做RAW的 ...

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【讨论】甘草酸苷的复杂药理机制与磷酸化过程

rainlijun 兄弟是做产品经理的,说的可能是外行话,请不要嘲笑:).最近在研究甘草酸苷的药理作用。发现甘草酸苷的作用机制很复杂,经典一些的作用如抗炎、抗过敏、免疫调节、抗病毒等,新发现的作用更多,比如调节血脂、血糖、抗艾滋病毒等。甘草酸在肠道代谢为甘草次酸后发挥作用。从分子生物学的水平上看,甘草次酸可以抑制磷脂酶A2的磷酸化,可以抑制NF-kB的磷酸化,可以抑制HMG蛋白的磷酸化,抑制补体的磷酸化。后来上网一搜,原来 ...

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【求助】miRNA表达载体与luciferase载体共转

丁香果 请问miRNA表达载体与luciferase载体共转,分别用哪个载体比较好?之前用软件预测到多个可调控靶序列的miRNA,现在想要确定究竟是哪个真的有作用,构建miRNA表达载体又比较费时,有买过miRNA表达载体能否可以推荐一下?zhujoker miRNA表达载体文献上报道的是比较多,现在主要趋向于用慢病毒载体来表达miRNA。如果你需要直接买已经构建好的的miRNA表达质粒,这是很贵的,几乎都是慢病毒 ...

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【求助】western blot 老做不出来

ccy115 大家请帮帮忙吧!我从MDCK细胞上抽提胞浆蛋白和核蛋白,胞浆蛋白浓度在0.5-1.5mg/ml 之间,核蛋白在1.0-2.5mg/ml之间,然后我各用了10ug蛋白上样量来做Western bolt检测IkB类因子和P65因子,蛋白大小在40KD到65KD之间,用的是半干转50mA,90min,转0.22UmPVDF膜后把胶拿去染色,没残留有目的条带区域蛋白,说明蛋白已经转印在膜上了,但是做了很多次了都没有曝光出条 ...

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【求助】如何查找某个磷酸激酶的特异底物?

benbenlixiubo 各位战友好!请问,蛋白激酶pkc epsilon都磷酸化哪些蛋白,我最近搜了几个如N型钙离子通道1-2、2-3loop、trpv1蛋白s800,觉得应该还有其他相关蛋白,希望有这方面知识背景的同志们再指点一二!谢谢zhujoker 建议参考以下网站,因涉及内容较多,所以不在此给你阐述。http://en.wikipedia.org/wiki/Protein_kinase_Cyingshang 建议参考下面这 ...

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【求助】于NF-KB 激活,P65磷酸化位点是ser536还是ser276?

伽利略 ...............................chenlydd 两者都有,蛋白磷酸化水平与其功能密切相关:检测其磷酸化水平可用抗磷酸化位点抗体检测。www.cellsignal.com公司有相应抗体出售。P65磷酸化位点:regulates apoptosis: S536‑pregulates cell growth: S536‑pregulates cell motility: S536‑pregulates transcription: S205‑p, T254‑p, S ...

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【求助】研究一个基因的5‘非翻译区是否含有低氧转录因子的结合位点,请指教

luoqq1985 这里做基因调控区的前辈一定不少,希望能给点意见,我在研究一个基因的5‘非翻译区是否含有低氧转录因子的结合位点,前期的工作是通过软件分析该区域是否存在这个结合位点的疑似序列,然后将这疑似的序列构人到PGL-3sv40中,转染细胞,经过低氧处理(低氧转录因子会增加)检测双萤光素酶的表达变化。如果有,还可以通过突变碱基进一步确定,但是如果不存在这样的结合位点,那我构出来的这个调控区质粒,不知道还可以做 ...

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【求助】抑制DNA的合成分为哪些方式

shenqi0622 请问,抑制DNA的合成分为哪些方式啊,例如抑制DNA合成的相关酶类,还有什么别的方式吗freecell 经过下述途径可达到此目的:1、使合成DNA所需的4种脱氧核苷酸形成障碍2、酶活力受抑制3、使DNA模板损伤4、使启动和调控DNA合成的复制子减少5、使DNA合成所需的能量供应障碍shenqi0622 非常感谢,总结的好!shiwei0708 影响因素就可作为抑制因素吧sanshenglou 学习啦hyj ...

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【求助】请教:耐化疗药物的胰腺癌细胞株

吾夜清心 请教:胰腺癌细胞有耐药的吗?如耐5-FU胰腺癌细胞株,耐多种药物胰腺癌细胞株我想从逆转耐药着手,有耐药的肿瘤细胞株吗? 谢谢:Pzhujoker 胰腺癌细胞有耐药的,比如胰腺癌耐药细胞株SW1990/FU的建立、鉴定。这是采用5-氟尿嘧啶(5-FU)浓度梯度递增法建立胰腺癌耐药细胞株SW1990/FU。耐多种药物胰腺癌细胞株,耐药细胞亚株SW1990/FU和SW1990/ADM,不过好像这些耐药细胞株的建立都是用药物诱 ...

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【求助】如何使用抑制剂?

magichunter 我目前在研究一个信号通路中的各个蛋白的激活情况,主要是就采用western的方法检测每种蛋白的表达量,实验中没有采用抑制剂,就是设定了空白组,诱导凋亡组,药物保护组以及单独药物作用组。但是看到有的其他文章中使用了抑制剂,不知道像我这样没有使用抑制剂来研究信号通路的是不是可以呢,会不会在审稿的时候被人家提出来呢?谁有相关的研究经验,大家多交流交流!chenlydd 当细胞破碎的时候,蛋白水解酶就 ...

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【求助】新手求NFkB的详细信号通路 最好是有文字解释的

jobsyu 新手求NFkB的详细信号通路 最好是有文字解释的,谢谢大家了!我这里有图,但是看不太懂附上melodyjoson 到网上找一篇综述来看chenlydd 中文NFkB综述链接http://www.cqvip.com/qk/94846A/200706/24789525.html本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming

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【求助】正、反义表达载体??

arthur1999 :(正、反义表达载体是什么意思,我不明白,请大家赐教。不胜感激!!!freecell 正反义表达载体就是把目的基因正向或者反向插入到质粒中再转染质粒中含有正向插入目的基因的就是正义表达载体含有反向插入的就是反义表达载体arthur1999 学习,谢谢了本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming

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