磨磨816 我刚接触细胞凋亡，想问一个比较小白的问题“我的实验是做了一个浓度梯度发生装置，通过它可以在一个区域内形成稳定的浓度梯度。想在这个区域内，进行细胞凋亡的实验。细胞凋亡只是一个应用，创新点不在这里。打算用hela细胞，进行在线的凋亡和检测，有什么好的方法吗？只有一台生物倒置显微镜，别的课题组还有一台荧光，可以借用一下。用什么凋亡的药物比较好，用的药物最好是便宜易得的，基础方法即可。请高手们指教啊， 我是学化学的，只 ...
roy_liu823 逆转录病毒和慢病毒载体经包装后可以得到携带外源基因的病毒，将病毒感染细胞后，外源基因可以整合到细胞基因组中，经过稳定的筛选后，就可以得到稳定表达外源基因的细胞。而一些真核表达载体如pcDNA3.1经脂质体转染进细胞后，也可以整合到细胞基因组中，并经过G418的筛选后，也可以得到稳定表达外源基因的细胞。我就很困惑：这两者有什么区别？用逆转录病毒或慢病毒载体的优势在哪？如果我想得到能稳定表达某一基 ...
吴佰霖 版主说： 应该是“肉眼可辨”.实验室看到一个现象，合成miRNA是目的蛋白出现肉眼可辩的下降（WB），但是稳定转染pcDNA－miRNA，目的蛋白没下降了，是不是两者发挥功能的方式不一致呢？zhujoker 有一个问题不知道你事先real-time验证你的miRNA表达没有？如果验证了，那么你在做稳转时你应该多挑几个单克隆，看看那个miRNA表达高，而相应的目的蛋白WB下降又比较厉害，这样你的后续实验才有代表性。还有一 ...
freedegree doxorubicin(阿霉素）文献说是一种p53诱导剂，我想咨询一下，在细胞中加入doxorubicin会使p53活性升高吗？如果不加的话，细胞中的p53是不是没有活性的？chenlydd 在细胞中加入doxorubicin会使p53活性升高，如果不加，细胞中的p53也是有活性的。参考信息如下：1 阿霉素 Adriamycin (Doxorubicin,ADM)阿霉素是一种抗肿瘤抗生素，可抑制RNA 和DNA的 ...
mnidr 请问最早的质粒是在哪发现的？原始的野生型大肠杆菌是不是没有质粒？我做实验用试剂盒提质粒有的大肠杆菌就提不出。多谢freecell 1946年，莱德伯格(Lederburg)和塔特姆(Tatum)发现的F因子是最早发现的质粒，1952年，由Lederburg正式命名为质粒。确切地讲，质粒是细菌内的共生遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并赋予宿主细胞一些表型，例如对抗生素的抗性，产生抗生素，降解复杂有机化合物及限制酶 ...
zsutx2005 最近经常做转染，所以经常会提质粒。我们用的是Omega的去内毒中提，最后溶水也是用的Endotoxin-free Elution Buffer. 提好的质粒一般放-20备用。由于隔段时间就会用，所以就出现冻融的问题。每次解冻会发现管里的白色物质有析出。拿去测定浓度，发现质粒浓度会下降20%-30%左右，这样如果继续按照之前测定的浓度做转染，就会影响质粒的定量。不知道质粒为什么会析出？有谁碰到过这种情况？如果一直 ...
david9931 请问各位大侠，有没有订做过磷酸化的丝氨酸或磷酸化的苏氨酸抗体，哪家公司做的比较好，小弟想订做目的蛋白特异位点的丝氨酸、苏氨酸的磷酸化的抗体，帮忙给指点下，多谢啦euthor_hsu 这种抗体定做很难。毕竟要的是抗一个特异的氨基酸的磷酸化位点。就我所知cisbio有anti-phosphothronine 和anti-phosphotyrosine的抗体，PAb和MAb都有，但是没有anti-phosph ...
yu3242001 最近在文献中看到一个新技术：gene set enrichment analysis (GSEA)，看不懂这个方法，请高手给解释一下这个方法是怎么一回事。万分感谢freecell Gene Set Enrichment Analysis分析，就是基因富集分析，它是用统计学的方法分析若干类功能基因簇（gene set）是否在不同的生物样本组中存在差异，通过芯片实验数据的分析，寻找不同样品的差异基因可能与哪些生物学功能相关，为后期实 ...
shashajiayou1124 如题，万分感谢zhao22840718 http://www.dxy.cn/bbs/thread/13828443libpku 直接登录NCBI，(http://www.ncbi.nlm.nih.gov),然后在查询的下拉菜单选择sequence,在对话框中输入“Caspase 8 promoter”即可本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄 ...
biowind 找公司做real-time PCR验证miRNA，报告上两个RNA浓度差不多样品编号 OD260 OD280 OD260 / OD280 OD260 / OD230 浓度（ng / µl）1 41.511 20.442 2.03 2.29 1660.452 34.937 16.922 2.06 2.08 1397.47但U6内参Ct值相差4左右，1号为16左右，2号为11左右要说明的是，1号和2号都是取得小鼠脑组织，虽然一号小鼠是某基因敲除的，但基本上生理功能都不受什么影响的，总不能真的体内 ...
luoqq1985 请问各位大侠，研究启动子，除了构建质粒，通过双报告基因检测之外，还可以做点哪方面的研究实验？如果要发文章，貌似只做点双报告基因很单调~~请各位指点，谢谢gzctxin 不知道您想问的是技术方法问题还是科学内容的问题。方法上除了报告基因技术，还有启动子克隆、酵母单杂交法、噬菌体展示技术、DNA足迹法、DNA迁移率变动法等等。内容上有基因启动子的鉴定，启动子结合蛋白的鉴定，启动子在基因工程上的运用等。zhu ...
吴佰霖 判断miRNA靶基因的标准是否有文献报道不外乎为三种实验1.报告基因2. 瞬时转染miRNA mimics或inhibitor3. 稳定转染但是在蛋白水平上，靶基因该下降多少？miRNA mimics用量多少才出现下降，才好判断？zhujoker 主要遵循以下几个常用原则: (ⅰ) miRNA与其靶位点的互补性; (ⅱ) miRNA靶位点在不同物种之间的保守性; (ⅲ) miRNA-mRNA双链之间的热稳定性; (ⅳ) miRNA靶位点处不应有复杂二级结构; (ⅴ) miR ...
libiqing77 最近老板要我到网上搜metacore这个软件，但是好像要收费，有没有哪位大哥用过这个软件，给指条明路，小弟谢过了！welcomemydxy MetaCore™ is an integrated software suite for functional analysis of experimental data. The scope of data types includes microarray and SAGE gene expression, SNPs and CGH arrays, pr ...
gln109 胞内钙离子荧光强度如何测定？chenlydd 见附件chenlydd 荧光钙离子测定技术在医学研究中的意义及应用钙离子是机体的重要元素，同时作为细胞内第二信使通过与钙调蛋白（Calmodulin，CaM）结合激活多种蛋白激酶（如腺苷酸环化酶、磷酸二酯酶、钙调蛋白激酶等）及诸多蛋白水解酶和核酸酶，从而参与包括细胞代谢、细胞周期等多种细胞功能的调节，在细胞的许多生命活动中担当着重要的角色。因此，钙离子测定在医学实 ...
jokaing 搜集疾病相关基因突变位点如：耳聋 线粒体基因A1555G、C1494TGJB2基因 235delCβ-地中海贫血 CD41-42(-CTTT)、IVS-II-654(C＞T)请大家补充疾病相关基因的主要突变位点slytjiaofei β-地中海贫血最常见的五种突变类型：CD71-72（+A），CD41-42（-4bp），CD17→0，IVS-Ⅱ-654C→T和-28A→Gsanshenglou 学习中lxgee G6PD缺乏症 (蚕豆病)G137 ...
王12345 怎样找到调节基因的预测miRNA，那个网址王12345 比如要找调节ICAM-2的预测miRNA怎样找，那个网址？zhujoker http://www.targetscan.org/这个网址是可以的。你直接把你的ICAM-2输入进去即可。chentielin www.microRNA.org本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixio ...
huiguijimo 请问采用脂质体转染siRNA干扰链时，为什么要用无血清的培养基因稀释干扰链？在用该干扰链处理细胞时，培养细胞用的培养基也要用无血清的培养基吗？这样长时间（48小时或者更长时间）会对细胞造成损害吧。。。请问各位，用脂质体转染细胞时具体应该怎样操作？bio_vector huiguijimo wrote:请问采用脂质体转染siRNA干扰链时，为什么要用无血清的培养基因稀释干扰链？在用该干扰链处理细胞时，培养 ...
jixianxiu1982 各位大侠，有谁知道AKT1的基因序列呀，我找了好久没找到。doctormy 人类AKT1序列：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/33875493jixianxiu1982 谢谢doctormy大侠jixianxiu1982 我还想继续知道其中PH结构域的基因序列，该怎么找到？还有血清中AKT能检测出来吗？何求美人折？ 血清中的AKT可用 ELISA 试剂盒检测。houcun 何求美 ...
sixiuwen123 请问我享用流式测凋亡,可现在我的载体本身有绿色荧光,EGFP的表达,本来想用annexin的,现在我该用什么方法上流式测凋亡呢freecell 测定凋亡的方法太多了.不一定要用流式.http://gene.bjmu.edu.cn/news/apoptosis.htm4trggg tunel可以imhkq 买了博士德的试剂盒 死活都做不出来 咋办呀本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...
254774755 请问各位大侠：我的基因构建结果如下CMV目的基因IRES目的基因PolyA我要做上面基因的pcr鉴定，请问CMV，IRES，polyA碱基个数有人知道吗？freecell 那你得先问自己了： 你为何要把做这样的克隆？zhujoker 呵呵，引起Freecell版主亲自关注了。的确你问的问题有的不是很清楚，既然质粒是你自己构建的，那么当初你不是用PCR的方法将你上面所谓的目的基因P出来的在连接上去？如果你当 ...
