【求助】质粒转染细胞

最近经常做转染，所以经常会提质粒。我们用的是Omega的去内毒中提，最后溶水也是用的Endotoxin-free Elution Buffer. 提好的质粒一般放-20备用。由于隔段时间就会用，所以就出现冻融的问题。每次解冻会发现管里的白色物质有析出。拿去测定浓度，发现质粒浓度会下降20%-30%左右，这样如果继续按照之前测定的浓度做转染，就会影响质粒的定量。不知道质粒为什么会析出？有谁碰到过这种情况？如果一直放在-4度，质粒降解的就很厉害。转染的质粒该怎么保存呢？麻烦高手帮忙解答。

质粒应该很稳定的呀

理论上是这样的，质粒似乎不是降解了，而是析出来了，以后就不能再溶解了。不知道发生了什么物理变化。

我在做博士课题时经常要往真核细胞中转染质粒，我的做法是不用Endotoxin-free Elution Buffer溶解质粒，而是直接用无菌水来溶解质粒。这样可能会去除Endotoxin-free Elution Buffer中的成份对转染的干扰作用。你可以试试。Endotoxin-free Elution Buffer中主要成分应该是TE，TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液里保存. 但TE对转染可能有影响。

我看到有人的经验是最后一步不用试剂盒的TE buffer
直接用水融
还有就是之前提上清的时候注意别把白色絮状物一起吸出来
可以用枪头先把漂浮的絮状物粘出来

下次是应该试下直接用无菌水溶，再看看结果怎样，谢谢各位的指导！