【求助】质粒转染细胞
丁香园论坛
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最近经常做转染,所以经常会提质粒。我们用的是Omega的去内毒中提,最后溶水也是用的Endotoxin-free Elution Buffer. 提好的质粒一般放-20备用。由于隔段时间就会用,所以就出现冻融的问题。每次解冻会发现管里的白色物质有析出。拿去测定浓度,发现质粒浓度会下降20%-30%左右,这样如果继续按照之前测定的浓度做转染,就会影响质粒的定量。不知道质粒为什么会析出?有谁碰到过这种情况?如果一直放在-4度,质粒降解的就很厉害。转染的质粒该怎么保存呢?麻烦高手帮忙解答。
质粒应该很稳定的呀
理论上是这样的,质粒似乎不是降解了,而是析出来了,以后就不能再溶解了。不知道发生了什么物理变化。
我在做博士课题时经常要往真核细胞中转染质粒,我的做法是不用Endotoxin-free Elution Buffer溶解质粒,而是直接用无菌水来溶解质粒。这样可能会去除Endotoxin-free Elution Buffer中的成份对转染的干扰作用。你可以试试。Endotoxin-free Elution Buffer中主要成分应该是TE,TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液里保存. 但TE对转染可能有影响。
我看到有人的经验是最后一步不用试剂盒的TE buffer
直接用水融
还有就是之前提上清的时候注意别把白色絮状物一起吸出来
可以用枪头先把漂浮的絮状物粘出来
直接用水融
还有就是之前提上清的时候注意别把白色絮状物一起吸出来
可以用枪头先把漂浮的絮状物粘出来
右左右右 wrote:
我看到有人的经验是最后一步不用试剂盒的TE buffer
直接用水融
还有就是之前提上清的时候注意别把白色絮状物一起吸出来
可以用枪头先把漂浮的絮状物粘出来
下次是应该试下直接用无菌水溶,再看看结果怎样,谢谢各位的指导!
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