求助 4T1细胞 质粒转染 有朋友用质粒和PEI转染过4T1吗？效果怎么样呢？

还转 4T1 细胞吗，我们的转染试剂能把转染效率提升到 90% 左右[呲牙]

这个确实失败率较高，质粒方面可以更换一下，增加转染效果

通常来说，4T1细胞对于质粒转染确实具有一定的挑战性。有研究表明，4T1细胞的转染效率相对较低，可能是由于其细胞壁和胞膜的结构、电荷等因素影响了质粒的进入。

对于改善质粒转染效率的方法，可以考虑以下几个方面：

1.优化转染条件：包括转染剂的种类和浓度、转染时间、细胞密度、培养基成分等参数。

2.使用辅助转染剂：如Polybrene、Protamine等，可以帮助质粒更好地进入细胞。

3.优化质粒质量和浓度：保证质粒质量纯度和浓度充足，避免质粒降解或过度稀释。

4.尝试其他转染方法：如电穿孔法、基因枪法等。

最后，建议您多尝试几种转染条件和方法，并结合检测结果进行优化，以提高质粒转染的效率。同时也可以参考一些文献报道的转染方法和实验条件，了解一下其他研究人员在类似细胞中的转染实验过程和条件，以获得更好的转染效果。

1.感染前一天，消化4T1细胞并计数，将细胞铺于24孔板中（以便在感染前细胞达30%-50%的汇合度，37°C过夜孵化细胞。

2. 解冻低温保存的慢病毒液，并且制备1：2病毒稀释液200µl加入细胞中。

3.向每孔加入Polybrene达到终浓度6ug/ml，晃匀孔板，37度孵化过夜。

4.移去含有慢病毒的培养基，加入500µundefined培养基。

5.换液，加入300µg/ml Hygromycin（Sigma）来选择稳定感染的细胞克隆。

6.每24h换液，300µg/ml Hygromycin（Sigma）来选择稳定感染的细胞克隆。

维持培养。

7.细胞逐渐由24孔板传入6孔板、6cm盘和10cm盘中100µg/ml Hygromycin维持培养。

8. 4T1-Gluc/Mluc细胞系鉴定: 取5×104细胞，用Passive Lysis裂解液裂解，加入荧光素酶作用底物，将转染质粒的细胞与阴性，阳性对照共同进行单报告基因检测。GFP和mCherry表达通过荧光显微镜观察。

培养条件 ：置于37℃、5％CO2培养箱中，用含10％胎牛血清（FBS; Hyclone, Tauranga, New Zealand）和1％双抗（100 U/ ml青霉素和100 μg/ ml链霉素，Hyclone, Logan, UT, USA）的高糖DMEM培养基培养，培养一天（密度大概80%）按照1：3的比例传代。

细胞传代所需时间：1天/代

筛选标记维持压力和选择压力：Hygromycin 100ug/ml 和300ug/ml 。