【求助】采用脂质体转染siRNA干扰链时，为什么要用无血清的培养基因稀释干扰链？
丁香园论坛
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请问采用脂质体转染siRNA干扰链时，为什么要用无血清的培养基因稀释干扰链？
在用该干扰链处理细胞时，培养细胞用的培养基也要用无血清的培养基吗？这样长时间（48小时或者更长时间）会对细胞造成损害吧。。。
请问各位，用脂质体转染细胞时具体应该怎样操作？
在用该干扰链处理细胞时，培养细胞用的培养基也要用无血清的培养基吗？这样长时间（48小时或者更长时间）会对细胞造成损害吧。。。
请问各位，用脂质体转染细胞时具体应该怎样操作？
huiguijimo wrote:
请问采用脂质体转染siRNA干扰链时，为什么要用无血清的培养基因稀释干扰链？
在用该干扰链处理细胞时，培养细胞用的培养基也要用无血清的培养基吗？这样长时间（48小时或者更长时间）会对细胞造成损害吧。。。
请问各位，用脂质体转染细胞时具体应该怎样操作？
RNA在血清中的稳定性大大降低。无血清只在孵育和短时间的情况下，一般来说4-6小时换成有血清的培养液，如果细胞状态差，直接用有血清的培养基
bio_vector wrote:
RNA在血清中的稳定性大大降低。无血清只在孵育和短时间的情况下，一般来说4-6小时换成有血清的培养液，如果细胞状态差，直接用有血清的培养基
还想问一下，如果我采用脂质体转染化学合成的siRNA的方法对某一基因进行干扰，假如想对细胞做较长时间处理（比如72小时，或96小时），48小时后需要给细胞更换培养基，换培养基时，还需要对其添加干扰链吗？还是只加培养基？
一般瞬转的RNA干扰链的有效作用时间是多少啊？
做实验梯度解决你的问题，这个从文献上看来是24小时可能观察到mRNA水平的改变，48小时观察到蛋白水平的改变，但是你的实验最优化的东西是你具体实验后的结果。但是换培养基是不是需要加入化学合成的siRNA也可能是针对你实验本身了，你如果在72小时甚至96小时不加mRNA水平又升高了的话，那我认为你就一次在24与48小时检测最好了。一般化学合成的siRNA的管不了72小时甚至96小时的。
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