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【求助】请教师兄师姐shRNA、siRNA和miRNA三者之间做干扰哪个更好些啊

xunyi09 各位师兄师姐,我准备做个干扰的实验,请问shRNA、siRNA和miRNA三者之间做干扰哪个更好些?这个实验下来经费多少啊?刚入门,望多指教呀!!:)freecell 各有优缺点。经费据估计,最少10K。wst207 10k 啊 不算多willion1985 siRNA 简单方便clion007 xunyi09 wrote:各位师兄师姐,我准备做个干扰的实验,请问shRNA、siRNA和miRNA三者之间做干扰哪个更好些?这个实验下来 ...

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【求助】microRNA 原位杂交

myskite 同一张组织切片能同时做microRNA 原位杂交和某基因的原位杂交以及免疫组化吗?zhujoker 不行,一般使用连续切片来达到你的这种研究目的。myskite 哦,谢谢myskite microRNA探针用生物素标记还是荧光标记,还要做某基因的免疫组化myskite 做microRNA的原位杂交,公司说,地高辛比较常用,那么,如果我还要做目的基因的原位杂交,是不是,也要用地高辛标记啊?组化用荧光标记行吗?没做过原位 ...

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【求助】请问测定报告基因荧光素酶活力需要用到哪些仪器及试剂盒?

lsdcfhyj 各位前辈,请问测定荧光素酶报告基因的荧光素酶活力需要用到哪些仪器及试剂盒?还有将含荧光素酶报告基因的质粒转染到癌细胞中建立稳定的细胞系,用哪种转染方法好些,建立稳定转染细胞系困难吗?大概几代后转染的基因会丢失?我查看了很多文献,但是不清楚具体的操作步骤及所需用到的仪器,希望做过这方面的前辈能给我指点一下,谢谢阳光海岛 荧光素酶的反应:Luciferin + ATP + ½02 ==(Luciferase)== Oxyluci ...

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【讨论】可以检测细胞内部的分泌型蛋白吗?

stillhorse 检测细胞的VEGF表达量,因为是分泌型蛋白,成熟体都分泌在胞外,大部分文献都是取细胞培养液上清做Elisa。如果实验要求不能检测上清液,可否用Elisa检测细胞内部的VEGF表达?胞内胞外的VEGF表达量是平行的,还是相对的?stillhorse 谢谢斑竹!那么是不是内部表达的VEGF高了,就说明细胞分泌在胞外的也高?二者的量是平行的吗?stillhorse 自己顶~~~期待做过胞内VEGF检测的高手 ...

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【求助】腺病毒质粒

hhyy601 别人赠予基因腺病毒质粒,邮寄过来的,拿到后,我该怎么办?多谢!freecell 版内以前有讨论的。如果是点在滤纸上的,将滤纸减碎,然后浸泡在TE溶液中若干时间。随后低速离心,取上清。用滤膜过滤。将消毒的TE溶液转化相应宿主菌扩增即可。whbf5 转化DH5a或者jm109这一类的菌中保种和扩增本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:sh ...

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【求助】阻断细胞内某一特定蛋白的表达

hxf_86 各位大侠,小弟请教一个问题哈~现在想寻求一方法,特异性的阻断细胞内一个蛋白(暂且叫这个蛋白叫B)的作用。以下是一些背景:1.蛋白B是从一个大蛋白(暂且叫作蛋白A)中水解下来的2.B从A中水解下来是自然现象,水解下来以后呢,A和B都有活性的3.现在想特异性的阻断B的活性,但是要求是不影响A的活性,所以不能用RNAi4.如果是用抗体的话,请问抗体能进入细胞核吗?谢谢各位大侠啦~hxf_86 哪位大侠能给予我帮助啊~有 ...

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做WB的时候,有一条非特异性的条带与我的目的条带很近,怎么分开呢?

ahuchxq 最近做IkBa,用的santa cruze的抗体,过去用的抗体都特别号只有一条很特异性的条带,但是最近换了相同货号的另一个批次的抗体上面总是有一天很浓的非特异性条带,配的10%的胶,12%, 8%的,都是分的不开,也尝试过跑的时间久点,可是都分的不是很开,有时候偶尔会分的比较好,就是明显能看到时两条带,很烦人,而且还很浓。不知道该怎么办?请求高人指点指点!感激不尽!karoleaf actually you don't need to ...

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【求助】1mIU/ml Insulin 与克怎么换算

mqjstudent 我现在需要测小鼠血液的胰岛素浓度,试剂盒给的标准样品单位为mIU/ml ,请问该如何换算?freecell 自己google一下 胰岛素换算,结果一堆。怎么这么懒呢,唉。http://blog.163.com/mxzhang81@126/blog/static/30062181200811521029937/limitless 能不能问下lz用的是哪个牌子的试剂盒tienam 园子里有,搜一下吧。本文由丁香园论坛提供, ...

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【求助】急切盼知对Roche和Promega公司的TUNNEL凋亡试剂盒质量和信价比的评价

yfsm 最近想买TUNNEL凋亡试剂盒,代理商分别给我推荐了Roche和Promega公司,以前没做过心理没辙,想请各位专家帮忙分析一下,非常感谢!xiaoluks 我想做TNNEL,罗氏的给你报价多少钱啊,楼主想买哪个货号的,如果好的话我也买一样的,呵呵,我也是没做过的,不过当时师姐有用DAB显色法做的,是用的罗氏的试剂盒,质量挺好的,不过我想用荧光的,楼主有什么意见?woxingwosu 我们用Roche,还可以。pro ...

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【求助】内含子SNP点 功能研究怎么做啊???急

buloubulou 本人前期试验发现内含子上某一SNP点与干扰素治疗疗效相关,想进一步做相关功能。虽然内含子上的SNP点不导致mRNA、蛋白水平的变化,但内含子并不是完全一点功能没有,比如调控作用什么的。该内含子SNP点的功能研究方向是什么?不知从哪下手, 请教各位大虾啦,急!!:~):~)freecell Refer to this paper:http://jcem.endojournals.org/cgi/content/full/90/5 ...

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【求助】MC1061/P3感受态细胞有何特别之处?

luoqq1985 想请问一下这里有没有哪位会用MC1061/P3这种感受态的?因为我之前常用的是Top10和DH-5a以及JCM109,最近要新做一个蛋白的表达质粒,提示要用MC1061/P3这个感受态。所以我想知道这个感受态与其他的有何不同?实验时需要注意什么?谢谢freecell 这个质粒来自何处?为何要用MC1601/P3这个感受态?luoqq1985 这个质粒是表达人的细胞核内的一个蛋白,不是我自己构建的,是别人 ...

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【讨论】细胞增殖检测方法:EdU VS BrdU

willion1985 直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一,是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法,其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物----BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期,和细胞一起孵育的BrdU能渗入DNA分子中,再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合,就能够检测到DNA复制活跃的细胞。但BrdU有一大缺点,就是需要变性DNA后才能与抗体结合,但这就破坏 ...

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【求助】细胞的购买

紫藤树 ΙΚΚε缺乏的小鼠肾小管上皮细胞可以买吗,在哪有?朋友们帮忙找一下,急用!!!!ylhuang0502 在ATCC上试试:atcc.orgfindlg atcc不是很会用啊,百度里面搜不出来吗本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming

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【求助】菜鸟**基因表达谱的相关信息

细胞微管 请教老师,他指点说下一步应该做基因表达谱,这样才“心里有底”,好开展深入研究。但是我不明白,基因表达谱这类的组学研究在科研思路中,例如一个story从刚发现到完成loop的过程中,究竟处于什么样的地位?第二个问题,请教各位老师,基因表达谱的研究结果应该是哪些基因表达增加哪些降低吧?那么从这样的结果中进行信息分析、分类和建立进化树,这些对我来说比较抽象的概念又怎样提示下一步的研究方向呢?灰常感谢!细胞微管 抱歉,因 ...

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【求助】请问MicroRNA与mRNA有区别吗?

haiya116 请教一下,看文献的时候发现MicroRAN有时也叫miRNA,不知道和mRNA有没有区别?是不是指同样的RNA?谢谢!zhujoker mRNA,为 messenger RNA 的简称,或称为信使RNA。mRNA是由DNA经由转录而来,带着相应的遗传讯息,为下一步转译成蛋白质提供所需的讯息。在细胞中,mRNA从合成到被降解,经过了数个步骤。在转录的过程中,第二型RNA聚合酶(RNA polymerase II)从DNA中复 ...

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【求助】关于钙螯合剂BAPTA-AM的负载

cn981 大家好,请问钙的螯合剂BAPTA-AM负载细胞时所用的负载液体是无钙的还是可以有钙的?我的看法:既然BAPTA-AM能螯合钙离子,那么在细胞外也能结合大量的钙离子,如果负载液有钙,BAPTA-AM有一部分会与钙离子结合,然后进入细胞内,这导致了单纯BAPTA-AM浓度的改变,同时也会促使一些被螯合的钙离子借助BAPTA-AM进入细胞,虽然进去以后也是螯合状态。不知道这种看法正确吗?请大家指正。另外,用BAP ...

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【求助】关于caspase-3的活化

olivial 最近想做caspase-3的WB,但关于caspase-3的活化有一个问题一直没弄明白,想请教。在没受刺激前,细胞内的caspase-3以procaspase的形式存在,当受到内外源性刺激时,被活化成异二聚体,该异二聚体由p12和p17两个亚基组成。但procaspase是怎样变成异二聚体的呢?是self-cleavage,还是上游信号如caspase-8、9裂解的?selenium Cleavage by gr ...

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【求助】关于提核蛋白的一些疑问。。。。

ahuchxq 最近提NF-kB的核蛋白,是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer,一个低渗的提胞浆蛋白,一个是高盐的提核蛋白的缓冲液,我想问的是,有没有可以不加核蛋白的buffer 直接把胞浆蛋白提取来后,直接加SDS 裂解液裂解上样做的?谢谢大家提供点信息。。。fangweibin119 ahuchxq wrote:最近提NF-kB的核蛋白,是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer,一个低渗的提胞 ...

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【求助】胰酶和血清是否影响p-akt表达?

olivial 最近想用western blot检测小胶质细胞活化后细胞内p-Akt表达情况(包括时间点),那么提蛋白时可否用胰酶消化的方法?加药前是否要将完全培养液换成无血清培养液?ylhuang0502 Q1. 提蛋白时可否的方法?A1.: 不要用胰酶消化, 贴壁细胞处理后,立刻至于冰上,用PBS洗三次后,直接加lysis buffer裂解提蛋白,lysis buffer的组分可查查文献,或在本版搜一下。Q2加药前?视情况而定,一般不必要加,但 ...

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【讨论】P53蛋白抗肿瘤

whl111 P53蛋白具有肿瘤抑制作用,其机制可能是影响肿瘤细胞的凋亡。各位战友有没有想过如果将P53于体外直接作用于肿瘤细胞是不是会引起细胞的凋亡?而如果想办法让P53蛋白在体内能够接触到肿瘤细胞是不是可以起到抑制肿瘤细胞生长的作用呢?pub_wang 不太可能,其通路在肿瘤发生中已被打破,肿瘤中整个平衡都变了。5米 一颗种子当它还是种子的时候,你把种子煮一下也许再也不会发芽,当这颗种子已经长成大树,你在树边浇点热水 ...

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