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【求助】将报告基因质粒转染到癌细胞中,是否都要共转染一个带有抗性基因的质粒来筛选阳性克隆?

丁香园论坛

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将报告基因质粒转染到癌细胞中,是否都要共转染一个带有抗性基因的质粒来筛选阳性克隆?
很多文献是这样做的,可是我认为报告基因质粒本身就带有抗生素标记基因,为什么还要共转染另一个抗性质粒?一直对着个问题很困惑,请懂这方面知识的前辈指点指点?还有就是质粒使用量的问题,我不清楚到底质粒用量与转染细胞之间到底是个什么样的比例合适,看了很多操作步骤,有的一个六孔板一孔就要用1到2微克,可是商家产品就有1微克包装的,这样的话,那用量未免太大了,还是我理解错了?
共转染一个有抗性基因的质粒是用来校正转染效率和蛋白量的,就像我们做western的内参actin一样。报告基因分析不需要筛选阳性克隆。
质粒使用量的问题:1个六孔板一孔是要用1到2微克,做报告基因分析时一般不需要用六孔板,太浪费了,24孔板或48孔板就可以了,48孔板转染120ng报告质粒就可以了。
从商家买回来的质粒不是叫你一次就用完的,买回来的只是种子,可以无限制在感受态细菌里扩增的。
很感谢xdb86的回答,让我弄懂了一直困惑的问题,只是我说的挑选阳性克隆,是因为我需要建立一个含报告基因的稳定的细胞系,用于后续的研究。我还有个问题,在感受态细胞中扩增出质粒,那我如何知道提出的质粒的量呢?谢谢
用核酸分析仪测定DNA含量(OD260,OD280),就代表质粒的量。
谢谢了

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