【求助】请问测定报告基因荧光素酶活力需要用到哪些仪器及试剂盒?
丁香园论坛
2889
各位前辈,请问测定荧光素酶报告基因的荧光素酶活力需要用到哪些仪器及试剂盒?还有将含荧光素酶报告基因的质粒转染到癌细胞中建立稳定的细胞系,用哪种转染方法好些,建立稳定转染细胞系困难吗?大概几代后转染的基因会丢失?
我查看了很多文献,但是不清楚具体的操作步骤及所需用到的仪器,希望做过这方面的前辈能给我指点一下,谢谢
我查看了很多文献,但是不清楚具体的操作步骤及所需用到的仪器,希望做过这方面的前辈能给我指点一下,谢谢
荧光素酶的反应:
Luciferin + ATP + ½02 ==(Luciferase)==> Oxyluciferin + AMP + CO2 + PPi + Light
所需仪器:
可以检测化学发光的仪器,比如:FlexStation,Victor,Envision等等……
所需试剂盒:
Promega公司提供一系列的基于荧光素酶的试剂盒——“Glo”系列。
转染方法:
脂质体,钙转,infusion,电转……各有优势,困难则是相对的,做得顺利就觉得不难,反之就觉得困难。
几代后转染的基因会丢失:
对于稳转细胞株来说,基本来时稳定的。但是基本的规律是传得代数越多,细胞的实验效果越差。至于具体是多少代,这又和细胞株以及基因有关,不能一概而论,需要通过自己的实验来积累经验。
Luciferin + ATP + ½02 ==(Luciferase)==> Oxyluciferin + AMP + CO2 + PPi + Light
所需仪器:
可以检测化学发光的仪器,比如:FlexStation,Victor,Envision等等……
所需试剂盒:
Promega公司提供一系列的基于荧光素酶的试剂盒——“Glo”系列。
转染方法:
脂质体,钙转,infusion,电转……各有优势,困难则是相对的,做得顺利就觉得不难,反之就觉得困难。
几代后转染的基因会丢失:
对于稳转细胞株来说,基本来时稳定的。但是基本的规律是传得代数越多,细胞的实验效果越差。至于具体是多少代,这又和细胞株以及基因有关,不能一概而论,需要通过自己的实验来积累经验。
谢谢您的回答,以后遇到关于这方面的问题还请教您
还有一个问题,我看到很多文献里都用G418来筛选转染成功的阳性克隆,是不是转染的质粒上都带有G418的抗性基因?
除了promega的双荧光素酶报告基因检测试剂盒,国产公司也不错,威格拉斯,国内首家生产双报告盒子的。质量不错,跟promega的效果一样
本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号:shixiongcoming