【求助】MAPK特异性抑制剂使用方法
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哪位高手能指点一下MAPK特异性抑制剂的使用方法?我培养的是海马神经元。:)谢谢谢谢
MAPK信号通路通常有3个主要的成员(ERK1/2, JNK1/2和p38),相应的抑制剂为U0126(还有一种PD98059,溶解性较差),SP600125和SB203580三种。使用的方法是先用DMSO先溶解成母液,然后在用无血清的细胞培养液稀释成工作液浓度。由于胎牛血清中还有较多的细胞因子,而细胞因子对细胞的MAPK信号通路有影响(而且影响较大),所以通常用不含有血清的细胞培养液来稀释MAPK特异性抑制剂(这时就用DMSO作为试剂的对照,排除试剂DMSO的影响)。通常的做法是将培养的细胞用无血清培养液稀释的抑制剂(U0126, SP600125, SB203580)共同孵育一定的时间段(自己设计),然后再加入某个因子(通常是刺激因子,给细胞以胁迫压力等)。最后用western-blotting技术检测活化的(或者磷酸化的)ERK1/2, JNK1/2,P38的表达水平。
同时附上一篇文献支持(其实文献不只一篇)
本人正在研究MAPK信号通路在食管癌中的病理生理学意思,正在使用以上3种MAPK信号通路常用的抑制剂啊。愿与同行交流,一起进步啊!
本人的联系方式 QQ: 994465791 邮箱:shutaozheng824@yahoo.com.cn
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学习了 谢谢!
不要忘了给我加分啊!谢谢
Sebolt-Leopold JS, 这个人是Raf-Ras-MEK信号通路抑制剂的大牛,在PubMed上查一查,关于MAPK抑制剂体内体外的用法的论著还是综述都是他写的
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