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体内可见光成像系统使用方法

相关实验:干细胞体内增殖分化实验

最新修订时间:

材料与仪器

步骤

5 . 3 . 2 体内可见光成像系统使用方法 体内可见光成像相对于其他的成像方法,其 成 像 过 程 简 单 ,快速(以Xenogen IVIS 100 系统为例)。 5 . 3 . 2 . 1 配 制 底 物 萤 光 素 溶 液 和 注 射 实 验 动 物 ⑴ 材 料 : D -萤光素(Xenogen Catalog#X R -1001)、 DPBS、W/O M g 2+ Ca2+. 针头滤器、注射器。 、 ’ 都 ⑵ 鲜 ^ 制 M m g /m l 萤 光 素 D P B s 溶 液 ,过 0.22p m 除菌滤器。 ⑶ 注 射 实 验 动 物 ,用 量 为 1〇4 yg 体 重 g|j 15〇m 萤 光 素 ^体 重 体重小鼠,注 射 1 _ ,即 L 5m g 萤光素。 請 里 。姻 ,对 于 1〇 g (4)腹腔注射后1〇〜I5min 后用成像系统观察。 注 意 萤 光 素 溶 液 可 先 配 制 成 2〇〇倍浓缩液置于_2〇弋保 15=g/ml。侧 同 —只小鼠来说,注 射 不 同 量 麟 光 素 ,发 光 强 度 ^ ’使 m 3 增多’发光也随之增强。③ —般来说,■ 素 腹 腔 注 射 老 鼠 后 ^ ’1 随着 , ,酶的细胞开始发光, 1Gmin后强度达到最高。在最高点 3 咖 后 ,今 f 上 3h/ #产 紙 发 魅 部 敎 ,舰 最 佳 錄 二 后 开 始 衰 但而要y 王意的是,对于不同的动物模型发光动力学过 、口 〜 25min。 兀 全 一 致 ,最 好 先 进 行 预 .1 5 2 .



鼠 ④ 萤 光 素 注 射 位 置 最 好 选 在 左 下 腹 部 ’对于非刺激性溶 、 (5)麻醉实验动物: 混合液麻醉实验动物。 可采用异氟烷(isoflurane)或克他命/甲苯噻嗪(ketamine/xyhzine> a•采用异氟焼来麻醉动物: i•称量异氟烷吸收过滤器的重量,看是否必要更换过滤器。当过滤器过重时, 即代表吸附物过多,应及时更换; ii. 确保氧气供应已切断,将蒸发器面板调至“OFF ”位 置 ,向蒸发器腔内注入 异氟烷,不要超过最大刻度指示线; iii. 打开氧气罐阀门,保证压力为55psi左右; iv. 将氧气流速调为lL/min; V•将动物放入麻醉仓,盖好盖子; vi. 打开麻醉仓管道阀门(确保麻醉多支管阀门处于关闭状态); vii. 将蒸发器面板刻度调到3%(动物在l~2min后就会被麻醉); viii. 轻晃麻醉仓,当动物无反应时,将蒸发器面板刻度调到1 5 % 〜 2%; ix. 将麻醉多支管阀门打开; , X. 迅速打开麻醉仓,取出实验动物,将圆锥吸人器套上; Xi•关闭麻醉仓管道阀门; xii. 开始进行成像操作或接种细胞。 一 — 注意:①一旦停止麻醉气体供应,动物会在几分钟内苏醒; ②本麻醉系统仅适用异 氟焼麻 醉 ,使用其他麻醉刻可能会导致危险;③在处理剩余的麻醉剂时实验室要具备良 好的通风条件,建议遵照已公布的安全条例进行操作;④ X G [麻醉系统要始终保持直立 状态;⑤当成像或接种细胞结束后,关闭氧气阀和麻醉多支管装置阀门。 b. 克他命/甲苯噻嗪混合液麻醉动物: i. 将克他命(l〇〇mg/ml)和甲苯噻嗪(2〇 mg/ml)按体积比4 : 1 混合。 ii. 釆用肌肉注射方式,克他命和甲苯噻曉的剂量分别为120mg/kg体重和6mg/kg 体重,即每克体重注射1.50。 iii_麻醉剂一般在注射后2~3min后起作用,如有必要,可 再 注 射 ”欠,用量为 每克体重注射0.7W 。 ’ 注意:①注射一次麻醉剂,动物的苏醒时间大约在60~9〇 min ,多次注射则苏酿时间 会 更 长 ( 船 壯 ) ;② 多 次 注 射 可 能 会 使 郝 紐 麻 醉 。 (6)成像系统的使用。 a. 系统启动:打开电脑主机和监视器;打开 IVIS成像系统;当电脑显示桌面后, 打开活体成像软件;按照提示输入用户ID(最多3 个字面),然后点击“D〇 ne” I 点击镜头控制面板的^ Initialize” 按钮初始化系统;等待系统进行初始化,可 以听到马达运转的声音和看到系统状态显示发生变化;等待镜头达到它的工作 温度(参看“工作温度”),直到镜头控制面板上绿灯亮;此时镜头温度被锁定 在工作温度- 1 0 5 ¾ ,就可以进行操作了。 b•在成像暗箱门下方是平台加热控制按钮,停止按钮,手动光照控制按钮和镜头状态指示灯。具

体操作如下:

i. 平台温度控制器:改变平台的温度,并且可以显示平台的摄氏温度或华氏温度 。、平台温度预设为 3 7 ℃ ,按 下 「set」按钮可以看到平台的实时温度,持续按 住 「set」按钮的同时按上下按钮可以改变平台温度,注意:如果改变的幅度过大,平台可能最多需要 45 min 的加热时间。

ii停止按钮:可以立刻停止成像暗箱内部所有 4 个马达的运转。

注意:只有当发生严重故障时停止按钮才可以被按下,如当平台上升过程中,承载的样品过高可能会损坏成像暗箱时。按下停止按钮后,如需重新启动系统,请按照程序启动系统并进行初始化。切 断 I V I S 系统的电源,等 待 5s ,重新接通电源,点击镜头控制面板上的初始化按钮,完成初始化程序后就可以进行成像操作了。 

iii光照强度控制旋钮:使用此旋钮可以改变成像暗箱内部 L E D 的光照强度,这 个 L E D 是用来照亮样品用的。 l e d 的 开 关 是 成 像 软 件 的 镜 头 控 面 板 「Light O n 」按钮。通过旋转按钮调整需要的光照强度,旋钮分十阶并有铃声提示,当达到所需的光照级别后,取消勾选镜头控制面板的「Light 〇 n」可以关掉 L E D 。

iv状态指示灯:指示是否可以打开成像暗箱门,只有当绿灯亮时才可以打开。一定不要在红灯亮时打开暗箱门。

(7) 气体麻醉:IVIS 系统包含一个麻醉气体控制装置,在成像暗箱的后面有 2 个 0.25英寸的进气口和出气口,暗箱的右边是控制开关,暗箱内也有 2 个 0.25 英寸的出气口和进气口分别位于样品台的左后和右后方。

注意:请仔细确认暗箱内的管道或其他固定装置不会发出荧光,使用者在进行成像操作前请测试这些管道和装置。

(8) 暗箱门的操作: IVIS 成像暗箱只需使用很轻的力即可牢固锁住箱门。请定期检查箱门的锁紧系统是否工作正常。连 接 IVIS 成像系统成像暗箱平台的挡帘可以遮盖住平台下部的空间,这个挡帘提醒使用者不要在平台下放任何物品。
(9) 成像前基本准备:
a.黑色垫纸:尽管平台是经过黑色电镀处理的,但还是建议使用者在成像时在平台上垫一张高品质的黑色垫纸,特别当测试的是生物样本时。高品质黑色垫纸可以有效的阻止光反射,并且可以保持平台清洁。
b.将成像物品置中:将样品放置在成像平台正中,关上暗箱门,勾选镜头控制面板 上 的 「Live」按钮,监视器上将显示样品的图像。如果样品已经置中,取消勾选 「Live」按钮后就可以进行成像操作了,如果偏禽中心,点 击 「Live」按钮后,打开箱门,调整样品的位置,重复上述步骤直到在监视器上看到样品图像。
c.发光材料:使用者请牢记「任何物体都会发突光」,大部分塑料,几乎所有的磁带、植物、染料、吃的食物 (大部分是植物)、鼠尿、动物窝里的草垫都已经被证实可以发荧光,采用荧光成像时应尽量避免这些物质的污染。使用者操作IVIS 成像系统时应戴上手套。 

(10) 系统关闭程序:不 建 议 在 1 天内多次开关系统,每天凌晨,通常是早上 4〜 6 点 ,IVIS 系统会自动进行背景测量和系统自检。如果必须关闭系统 , 一 定要严格按照以下步骤进行。 -
a.保存实验结果,关闭活体成像软件。
b.关闭 IVIS 成像暗箱。
c.关 闭 Windows 操作系统。

来源:丁香实验

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