chengyang2872 各位师兄师姐好!我是一名刚刚开始做实验不久的研究生,只知道做PCR。我的导师说他的课题想测β-catenin(WNT通路)在肝癌细胞中表达的量,要用流式细胞术测,交给我做。可是我没有接触过这类的东西,所以想请教一下师兄师姐,β-catenin这个蛋白是存在于细胞核内,还是在细胞质中,还是分泌到细胞外? 另外我用流式细胞术应该怎么测试这个蛋白?或者有没有哪位师兄师姐有这方面的资料,可以传给我的,感 ...
love925929 有哪位大虾知道BMP/Smad信号通路的化学抑制剂?急等,谢谢!徐旖旎 楼主,你得到答案了吗?能否共享一下?坚持不懈ing 你好,我现在也需要做点,你找到了吗本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming
valerie2011 各位园友大家好我在一个靶基因库中查到miRNA-28-5p的靶基因有IKBKB,在pubmed中查到IKBKB also known as IKK2,IKKB,NFKBLKB,FLJ33771,FLJ36218,MGC131801等。但我在有的靶基因库中查到的靶基因是FLJ38028,或是FLJ36031,MGC35097,想请教一下,FLJ后面的数字代表什么啊? 是表示基因序列长度吗?在pubmed上面查FL ...
viola2010 您好,我是新手,pten (loxp/loxp)中loxp是什么意思?Fsp-cre中cre什么意思啊?谢谢woxingwosu 是基因敲除的一种手段。基本原理可见http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/CreLoxP.htmlviola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好 ...
huaxiflame05 各位,我的实验最近遇到了问题,检测一个趋化因子,Western 重复性很差,只有蛋白上样量接近200ug的时候才能勉勉强强看到很弱的条带,并且杂带很多。师兄建议让公司合成纯化蛋白。但问题是原核表达的蛋白分子量35kDa,在真核系统里,这个蛋白质高度糖基化,分子量可达到60kD。在这种情况下,如何构建阳性对照呢?**解答magichunter 换成单克隆抗体应该特异性更好些。另外,你不能用与实验动物相 ...
紫叶竹韵 做IP,之后Western 分析,看到有两条带,在25和50KD左右,应该是抗体的两条带,但是我的目的蛋白也是52KD的,这该怎么区分呢。woxingwosu 最好是选择与做IP不同来源的抗体来做(比如说IP用鼠的抗体,WB就用兔的抗体),这样就不会检测到抗体的两条带。如果没有不同来源的抗体的话,就要做IP的时候尽量少放点抗体,跑胶跑得远一点,使得目的蛋白能够被看到,不过由于你的蛋白是在是太接近重链了,要分开难度还 ...
48126 http://www.univ-bio.com/Products.asp我在优宁维的网站上查到很多关于C-JUN的抗体,磷酸化又分很多种,不知道如何选择,有知道的战友指点一下,谢谢!我要准备做WB,IHC.biolinkphilic 我觉得如果真想在这家公司购买,咨询该公司就可以了。其实专业的抗体网站看看就知道应该要了解那些信息。如Abcam、santa cruz和cst等等最后,提供一个学习的博客,可以看看http:/ ...
一光年 最近要做生殖的细胞方面的实验,前期一直用在垂体细胞原代培养,但是一直困扰没有促性腺激素细胞系,但是在网络中搜索,发现老外的文章中经常提到αT3-1,LβT2 或LβT4细胞系,在ATCC等知名的细胞库也未发现这些细胞系,不知道各位高手指点在哪里可以找到这几种细胞系?不甚感激!!veimojie 我一直也在做这方面的研究 什么地方能有啊 ?banana_smile 我也想做这方面的研究,恳请知道的大虾告之beastjane “一光年 ...
zxmgugl 最近在查某个基因的启动子区CpG岛,发现一个问题:在一个CpG finder的软件上,如果输入的是这个基因第一个外显子第一个碱基的上游序列,能反馈出一段CpG岛(虽然长度只有50多bp,这点也很奇怪,因为这个在线软件的CpG岛界定标准就是长度大于200bp);如果输入的是这个基因第一个外显子序列内第一个出现的ATG序列的上游序列的话,软件又分析出一段除了前面那个CpG岛,一段更长的CpG岛。所以,就有 ...
winniw214 同样的菌液,用来提蛋白的。因为摇床问题,今天先摇了一半,离心后-80度冻存。另一半正在摇,准备明天离心冻存的。但是发现明天没有离心瓶了。由于是冻菌,不方便借别人的离心瓶。我是想可不可以将现在冻着菌的瓶子拿出来离,反正菌是一样的。但是我介意的是离心是4度,菌液冻存后从-80到4度,又累积了新的菌后又存-80,这样可以吗?紧急提问啊,在线等,谢谢!dnazyme 如果是哺乳动物肯定很多细胞死掉了.大肠也许坚强一些 ...
liuhp2158 如题,阅读文献碰到illustrator gene,不得其解,请教,谢谢各位XDJM!woxingwosu 请提供一下上下文来参考一下~~liuhp2158 ....This relatively simple perturbation of the DNA methylation systemnot only mimicked the dietary effect of royal jelly on phenotypebut also changed the cytosine methyla ...
sophiebaby 样品是经过陈化的烟叶,比较干燥的,其表面有一定量的微生物,我需要提取这些微生物的总DNA经过buffer浸泡和摇1h左右,得到烟叶浸出液,然后双层纱布过滤,离心收集沉淀,进行常规的细菌基因组提取步骤就是裂解、抽提什么的,大致上按照文献所述。但是我死活提取不出来,nanodrop只有很低的浓度,跑电泳没有完整的条带。我的下一步是要扩增16s的,有一两次有基因组条带,但是PCR也没有出来。试剂盒公司 ...
linjl010 请问各位高手,我需要将1000多和2000多的两个片段连接起来,用重叠延伸PCR技术的方法怎么也连接不起来?(重叠碱基23个)总是扩增出1000多的杂带,没3000多的目的片段,原因可能是什么?希望大家给予指点!谢谢!devil19840 你做extension overlap PCR的多么?不妨将完整的实验方法列上来,包括每步PCR的步骤和回收的步骤、方法~23bp我觉得确实还是有些勉强,尤其你的片段长,如果 ...
songyong 各位亲们:请问用免疫组化的方法检测出来的NF-kB 是已经活化了的NF-kB呢?还是无活性的也包括进去啦?谢谢ronaldo_zj 体内的细胞信号通路研究确实不好评价,不过就NF-kappaB这个通路来说,我个人觉得可以通过一下几个方法来衡量:1. 经典的NF-kappa B的活化往往都是NF-kappaB(包括p50、p65、p52等)作为转录因子活化而转位至细胞核内发挥转录调节功能。所以我觉得楼主可以首先观察和比 ...
lilililiwoody 比如我查的资料D-丝氨酸的分子量是105.09,白介素-1的分子量是17KD,载脂蛋白E的分子量是34145D,它们的单位不同,我怎么比较它们的分子量大小?谢谢各位大侠,**了!woxingwosu D:daltonKD: kilodoltons, = 1000 D,是D的一千倍lilililiwoody 谢谢版主!本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙 ...
dhy481 如图,红色是TRITC标记的细胞膜上的一个蛋白,绿色是FITC连接的一段小肽,是在细胞固定前加入到培养基里的,大家帮忙看看,这是不是共定位,谢谢大家~woxingwosu 看起来好像不是共定位。如果要说共定位,或者说小肽能结合到膜上的蛋白,我认为至少在膜上的绿色至少要比其他的地方要亮的多,这样才能说明是共定位,你这个有可能是非特异性的分布而已。需要加个对照来看看吧。个人意见,呵呵~~P.S. 这个图照得太不清楚了, ...
华丽转身然后悲伤 我很想知道caspase3 的前体pro-caspase3 在细胞中的存在情况,希望大家帮帮忙zhangy1027 Caspase家族Caspase属于半胱氨酸蛋白酶,相当于线虫中的ced-3,这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶,一旦被信号途径激活,能将细胞内的蛋白质降解,使细胞不可逆的走向死亡。它们均有以下特点:①酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性;②总是在天冬氨酸之后切断底物,所以命名为caspase(cys ...
淡叶云梦 我们前人做的质粒转染 是3.0 荧光显微镜照相 能拍出绿色荧光 但有人说3.0是找不出来的 3.1才行 请问什么是正确答案biolinkphilic 应该要带有表达荧光蛋白GFP的基因才可以吧,跟3.0和3.1有什么关系呢?求战友不吝赐教woxingwosu PCDNA3.0 和3.1都是没有荧光的,除非是克隆的时候自己加上的GFP,否则看到的荧光可能是背景。如果把显微镜的exposure时间调得很长,细胞都会看到荧光。artneer 建议使用 ...
viola2010 您好,我是新手,阅读文献时看到 TOPFLASH and FOPFLASH reporter vectors?不明白是什么?All transfections included the renilla luciferase expression vector, pRL-SV40 as a control for sample-to-sample variation in transfection.怎末理解?在顺转过程中,如何观察转染效率?zhujoker 使用GFP做转染效率对照 ...
viola2010 您好,请问mice bearing a β-catenin-responsive lacZ reporter gene 是什么意思?如何构建?zhujoker 就是老鼠带有β-catenin反应的一个lacZ报告基因,检测β-catenin的变化viola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming