chengyang2872 各位师兄师姐好！我是一名刚刚开始做实验不久的研究生，只知道做PCR。我的导师说他的课题想测β-catenin（WNT通路）在肝癌细胞中表达的量，要用流式细胞术测，交给我做。可是我没有接触过这类的东西，所以想请教一下师兄师姐，β-catenin这个蛋白是存在于细胞核内，还是在细胞质中，还是分泌到细胞外？ 另外我用流式细胞术应该怎么测试这个蛋白？或者有没有哪位师兄师姐有这方面的资料，可以传给我的，感 ...

love925929 有哪位大虾知道BMP/Smad信号通路的化学抑制剂？急等，谢谢！徐旖旎 楼主，你得到答案了吗？能否共享一下？坚持不懈ing 你好，我现在也需要做点，你找到了吗本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

valerie2011 各位园友大家好我在一个靶基因库中查到miRNA-28-5p的靶基因有IKBKB，在pubmed中查到IKBKB also known as IKK2,IKKB,NFKBLKB,FLJ33771,FLJ36218,MGC131801等。但我在有的靶基因库中查到的靶基因是FLJ38028,或是FLJ36031，MGC35097，想请教一下，FLJ后面的数字代表什么啊？ 是表示基因序列长度吗？在pubmed上面查FL ...

viola2010 您好，我是新手，pten (loxp/loxp)中loxp是什么意思？Fsp-cre中cre什么意思啊？谢谢woxingwosu 是基因敲除的一种手段。基本原理可见http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/CreLoxP.htmlviola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好 ...

huaxiflame05 各位，我的实验最近遇到了问题，检测一个趋化因子，Western 重复性很差，只有蛋白上样量接近200ug的时候才能勉勉强强看到很弱的条带，并且杂带很多。师兄建议让公司合成纯化蛋白。但问题是原核表达的蛋白分子量35kDa，在真核系统里，这个蛋白质高度糖基化，分子量可达到60kD。在这种情况下，如何构建阳性对照呢？**解答magichunter 换成单克隆抗体应该特异性更好些。另外，你不能用与实验动物相 ...

紫叶竹韵 做IP，之后Western 分析，看到有两条带，在25和50KD左右，应该是抗体的两条带，但是我的目的蛋白也是52KD的，这该怎么区分呢。woxingwosu 最好是选择与做IP不同来源的抗体来做（比如说IP用鼠的抗体，WB就用兔的抗体），这样就不会检测到抗体的两条带。如果没有不同来源的抗体的话，就要做IP的时候尽量少放点抗体，跑胶跑得远一点，使得目的蛋白能够被看到，不过由于你的蛋白是在是太接近重链了，要分开难度还 ...

48126 http://www.univ-bio.com/Products.asp我在优宁维的网站上查到很多关于C-JUN的抗体，磷酸化又分很多种，不知道如何选择，有知道的战友指点一下，谢谢！我要准备做WB,IHC.biolinkphilic 我觉得如果真想在这家公司购买，咨询该公司就可以了。其实专业的抗体网站看看就知道应该要了解那些信息。如Abcam、santa cruz和cst等等最后，提供一个学习的博客，可以看看http:/ ...

一光年 最近要做生殖的细胞方面的实验，前期一直用在垂体细胞原代培养，但是一直困扰没有促性腺激素细胞系，但是在网络中搜索，发现老外的文章中经常提到αT3-1，LβT2 或LβT4细胞系，在ATCC等知名的细胞库也未发现这些细胞系，不知道各位高手指点在哪里可以找到这几种细胞系？不甚感激！！veimojie 我一直也在做这方面的研究 什么地方能有啊 ？banana_smile 我也想做这方面的研究，恳请知道的大虾告之beastjane “一光年 ...

zxmgugl 最近在查某个基因的启动子区CpG岛，发现一个问题：在一个CpG finder的软件上，如果输入的是这个基因第一个外显子第一个碱基的上游序列，能反馈出一段CpG岛（虽然长度只有50多bp，这点也很奇怪，因为这个在线软件的CpG岛界定标准就是长度大于200bp）；如果输入的是这个基因第一个外显子序列内第一个出现的ATG序列的上游序列的话，软件又分析出一段除了前面那个CpG岛，一段更长的CpG岛。所以，就有 ...

winniw214 同样的菌液，用来提蛋白的。因为摇床问题，今天先摇了一半，离心后-80度冻存。另一半正在摇，准备明天离心冻存的。但是发现明天没有离心瓶了。由于是冻菌，不方便借别人的离心瓶。我是想可不可以将现在冻着菌的瓶子拿出来离，反正菌是一样的。但是我介意的是离心是4度，菌液冻存后从-80到4度，又累积了新的菌后又存-80，这样可以吗？紧急提问啊，在线等,谢谢！dnazyme 如果是哺乳动物肯定很多细胞死掉了.大肠也许坚强一些 ...

liuhp2158 如题，阅读文献碰到illustrator gene，不得其解，请教，谢谢各位XDJM！woxingwosu 请提供一下上下文来参考一下~~liuhp2158 ....This relatively simple perturbation of the DNA methylation systemnot only mimicked the dietary effect of royal jelly on phenotypebut also changed the cytosine methyla ...

sophiebaby 样品是经过陈化的烟叶，比较干燥的，其表面有一定量的微生物，我需要提取这些微生物的总DNA经过buffer浸泡和摇1h左右，得到烟叶浸出液，然后双层纱布过滤，离心收集沉淀，进行常规的细菌基因组提取步骤就是裂解、抽提什么的，大致上按照文献所述。但是我死活提取不出来，nanodrop只有很低的浓度，跑电泳没有完整的条带。我的下一步是要扩增16s的，有一两次有基因组条带，但是PCR也没有出来。试剂盒公司 ...

linjl010 请问各位高手，我需要将1000多和2000多的两个片段连接起来，用重叠延伸PCR技术的方法怎么也连接不起来？（重叠碱基23个）总是扩增出1000多的杂带，没3000多的目的片段，原因可能是什么？希望大家给予指点！谢谢！devil19840 你做extension overlap PCR的多么？不妨将完整的实验方法列上来，包括每步PCR的步骤和回收的步骤、方法~23bp我觉得确实还是有些勉强，尤其你的片段长，如果 ...

songyong 各位亲们：请问用免疫组化的方法检测出来的NF-kB 是已经活化了的NF-kB呢？还是无活性的也包括进去啦？谢谢ronaldo_zj 体内的细胞信号通路研究确实不好评价，不过就NF-kappaB这个通路来说，我个人觉得可以通过一下几个方法来衡量：1. 经典的NF-kappa B的活化往往都是NF-kappaB（包括p50、p65、p52等）作为转录因子活化而转位至细胞核内发挥转录调节功能。所以我觉得楼主可以首先观察和比 ...

lilililiwoody 比如我查的资料D-丝氨酸的分子量是105.09，白介素-1的分子量是17KD，载脂蛋白E的分子量是34145D，它们的单位不同，我怎么比较它们的分子量大小？谢谢各位大侠，**了！woxingwosu D：daltonKD: kilodoltons, = 1000 D,是D的一千倍lilililiwoody 谢谢版主！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

dhy481 如图，红色是TRITC标记的细胞膜上的一个蛋白，绿色是FITC连接的一段小肽，是在细胞固定前加入到培养基里的，大家帮忙看看，这是不是共定位，谢谢大家～woxingwosu 看起来好像不是共定位。如果要说共定位，或者说小肽能结合到膜上的蛋白，我认为至少在膜上的绿色至少要比其他的地方要亮的多，这样才能说明是共定位，你这个有可能是非特异性的分布而已。需要加个对照来看看吧。个人意见，呵呵～～P.S. 这个图照得太不清楚了， ...

华丽转身然后悲伤 我很想知道caspase3 的前体pro-caspase3 在细胞中的存在情况，希望大家帮帮忙zhangy1027 Caspase家族Caspase属于半胱氨酸蛋白酶，相当于线虫中的ced-3，这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使细胞不可逆的走向死亡。它们均有以下特点：①酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性；②总是在天冬氨酸之后切断底物，所以命名为caspase（cys ...

淡叶云梦 我们前人做的质粒转染 是3.0 荧光显微镜照相 能拍出绿色荧光 但有人说3.0是找不出来的 3.1才行 请问什么是正确答案biolinkphilic 应该要带有表达荧光蛋白GFP的基因才可以吧，跟3.0和3.1有什么关系呢？求战友不吝赐教woxingwosu PCDNA3.0 和3.1都是没有荧光的，除非是克隆的时候自己加上的GFP,否则看到的荧光可能是背景。如果把显微镜的exposure时间调得很长，细胞都会看到荧光。artneer 建议使用 ...

viola2010 您好，我是新手，阅读文献时看到 TOPFLASH and FOPFLASH reporter vectors？不明白是什么？All transfections included the renilla luciferase expression vector, pRL-SV40 as a control for sample-to-sample variation in transfection.怎末理解？在顺转过程中，如何观察转染效率？zhujoker 使用GFP做转染效率对照 ...

viola2010 您好，请问mice bearing a β-catenin-responsive lacZ reporter gene 是什么意思？如何构建？zhujoker 就是老鼠带有β-catenin反应的一个lacZ报告基因，检测β-catenin的变化viola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming