【求助】烟叶表面微生物总DNA我死活提不出来...暴走...

样品是经过陈化的烟叶，比较干燥的，其表面有一定量的微生物，我需要提取这些微生物的总DNA

经过buffer浸泡和摇1h左右，得到烟叶浸出液，然后双层纱布过滤，离心收集沉淀，进行常规的细菌基因组提取步骤

就是裂解、抽提什么的，大致上按照文献所述。但是我死活提取不出来，nanodrop只有很低的浓度，跑电泳没有完整的条带。

我的下一步是要扩增16s的，有一两次有基因组条带，但是PCR也没有出来。

试剂盒公司说用叫纯化试剂盒就可以纯化基因组了，我试了，但是结果还是没有PCR出来。

之前想买个试剂盒，但是试剂和公司的人说他们之前试过提取这个样品，也没有成功。

我崩溃了！老板说让我用乙醇沉淀的方法纯化，别用试剂盒了。好吧！但是我现在连完整的基因组都没有啊~

估计是富集得不够多，浸出液离心得到的沉淀也是杂质居多，我用过滤的方法，中速滤纸，去掉部分杂质，再离心，

提取得到有一点点条带，但是很弱，PCR也没有出来，想纯化一下，估计纯化之后就没有了。

我好崩溃！...老板说这个星期有就要往下做，没也要往下做...鸭梨啊！！

各位有没有什么好主意？有人做过这个吗？求助~

救救我！....

有没有人啊？？~~555

你是不是首先要富集培养一下这些微生物？

是的，我看文献的富集过程就是烟叶+水，210rpm 27℃ 20min。但是我尝试了一下，没有成功也。也有缓冲液+烟叶 超声波处理10min，但是超声波具体频率什么的 仪器什么的，都没有说。

文献轻描淡写...

我说的富集,重点指用适宜的培养基培养.让微生物数量多些,再进行分析.

哦 是这样的，我想鉴定未经培养的样品的微生物多样性 所以没有培养富集 如果想多点 只能增加样品量了。悲催

可不可以直接裂解--离心--PCR ? 抽提过程损失太大 总量又很少！