土壤微生物总DNA提取及纯化
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2029
实验试剂
TENP缓冲液(50 mmol/L Tris, 20 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, 1% PVP, pH 10.0)
PBS缓冲液(137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 10 mmol/L Na2 HPO4 , 2 mmol/L KH2 PO4 , pH 7.4)
DNA提取缓冲液(100 mmol/L Tris, 100 mmol/L EDTA, 100 mmol/L Na3 PO4 , 1.5 M NaCl, 1%CTAB, pH 8.0)
实验设备
实验材料
实验步骤
(3) 10 000 r/min离心5 min，弃上清，重复洗涤多次至上清基本为无色；
(6) 加入2 mL 20% SDS，65℃水浴2 h，每隔20 min颠倒混匀；
(7) 8 000 r/min室温离心15 min，取上清，用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次；
(9) 11 000 r/min 4℃离心20 min收集DNA沉淀；
(10) 70%乙醇漂洗两次，干燥后用100 μL ddH2 O(含RNAse 20 mg/mL)溶解，转入1.5 mL离心管。
(2) 每个上样孔加入50 μL粗DNA，进行低电压长时间电泳(4℃, 25 V, 8 h)；
