判断细胞死活，并计数死活细胞数量最恰当的方法

细胞计数仪是最方便的，可以做流式进行分选，而荧光显微镜需要自己计数

一般用细胞技术法 精确一点的话用流式

按你列举的这几个，流式细胞仪相对最恰当

建议选用流式细胞仪，流式细胞仪的准确度高而且操作相对简便

目前常用的方法有很多,如有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、H放射性同位素掺入法、MTT法等。可以根据各自的优缺点及实际情况进行选择:

一、染色计数法

1. 化学染色法

染色计数法是细胞培养中检查细胞死活最常用的方法，直接利用死细胞和活细胞对染料的不同亲和力，检查细胞活性，能在光学显微镜下观察到染色结果。

本染色法方便实用，价格低廉，操作简单。但是台盼蓝染色时，时间不宜过长，否则部分活细胞也会着色，会干扰计数。而且，细胞没有经过固定，形态不清晰。

2. 荧光染色法

一些荧光染料对死细胞和活细胞也有不同的作用效果，利用荧光显微镜检测细胞活性。

这种检测方法相比传统的染料，具有灵敏度高，操作简便，结果容易分辨等特点，而且利用双染法还可以分辨活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞、死亡细胞。在细胞凋亡的检测上有很广泛的应用。

缺点在于，要求特殊的仪器进行检测，如荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜或流式细胞仪。而且通过荧光染料具有毒性，操作时需要带手套。

二、克隆（集落）形成试验

克隆形成试验是测定单个细胞增殖能力的有效方法之一，常见的方法有平板克隆形成试验、软琼脂形成试验等。

这种方法常见于抗肿瘤药物敏感性试验，肿瘤放射生物学试验等。

虽然该方法比MTT和SRB法的敏感性更强。但是该方法较为繁琐并耗时不适合同时监测大量样品，而且在手动计数过程中带有非常大的不确定性，特别是当形成的细胞克隆大小差异较大时，很难得到更有效、精确的数据。

三、比色法

1. MTT、XTT及CCK-8法

2. Alamar Blue法

3. 乳酸脱氢酶（LDH）释放法

4. SRB法

5. ATP含量测定法

下面是对您提到的三种方法进行简要比较：

1. 电子显微镜（Transmission Electron Microscopy, TEM）：电子显微镜可以提供高分辨率的细胞结构图像，可用于观察细胞形态的细节，并根据细胞的形态特征判断其生死状态。然而，使用电子显微镜需要特殊的设备和专业的操作技术，对样品制备有严格要求，且无法对大量细胞进行快速计数。

2. 荧光显微镜（Fluorescence Microscopy）：荧光显微镜结合适当的细胞染色方法，如荧光染料或标记抗体，可以对细胞进行荧光成像。通过观察染色的细胞，可以根据荧光信号的存在与否来判断细胞的生死。荧光显微镜通常具有较好的灵敏度和分辨率，适用于观察和计数大量细胞。

3. 流式细胞仪（Flow Cytometry）：流式细胞仪利用细胞在流动液体中单个通过激光束的原理，可对大量细胞进行快速准确的分析和计数。通过染色或标记的细胞样品，流式细胞仪可以通过检测荧光信号或其他参数来区分生死细胞，并计数它们的数量。流式细胞仪具有高通量和多参数分析的优势，适用于细胞计数和生死分析。

在选择适当的方法时，您可以考虑以下因素：实验目的、样品数量、实验设备和技术可用性以及预期结果的细节需求。根据您的具体要求，您可以选择最适合您实验的方法。

细胞计数仪是最方便的，你列举中的流式记录死活细胞最好。

采用微电极技术(利用死活细胞膜两侧电位的差异)、全自动分析细胞记数仪和流式细胞仪等，可对细胞的死活进行精确的批量检测。

流式细胞仪法用来判断细胞死活的常用荧光探针有二大类：

一类是能透过活的细胞膜进入细胞内而发出荧光的物质，例如FDA可被活细胞持留而发出黄绿色荧光，若细胞有损伤则会从细胞中流失，观察不到荧光。

另一类是不能透过活细胞膜，但能对固定的细胞及膜有破损的细胞的核进行染色，例如碘化丙啶(PI，Propidium iodide )和溴化乙锭( EB，Ethidium bromide )就是常用的第二类荧光探针。碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。