【求助】Western blot 的阳性对照
丁香园论坛
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各位，我的实验最近遇到了问题，检测一个趋化因子，Western 重复性很差，只有蛋白上样量接近200ug的时候才能勉勉强强看到很弱的条带，并且杂带很多。师兄建议让公司合成纯化蛋白。但问题是原核表达的蛋白分子量35kDa，在真核系统里，这个蛋白质高度糖基化，分子量可达到60kD。在这种情况下，如何构建阳性对照呢？
~undefined*解答
~undefined*解答
换成单克隆抗体应该特异性更好些。
另外，你不能用与实验动物相同种属的2抗，就是如果你的sample来自于mouse，你的2抗最好别用mouse的，用兔的试试应该更好。
再有，如果你的趋化因子是分泌性的，建议用ELISA试试。
另外，你不能用与实验动物相同种属的2抗，就是如果你的sample来自于mouse，你的2抗最好别用mouse的，用兔的试试应该更好。
再有，如果你的趋化因子是分泌性的，建议用ELISA试试。
magichunter wrote:
换成单克隆抗体应该特异性更好些。
另外，你不能用与实验动物相同种属的2抗，就是如果你的sample来自于mouse，你的2抗最好别用mouse的，用兔的试试应该更好。
再有，如果你的趋化因子是分泌性的，建议用ELISA试试。
谢谢你的建议
我的sample是人乳腺癌细胞的蛋白，一抗为羊抗人，二抗为兔抗羊，跟你提的建议一致，问题在该趋化因子的单抗从来都没用于实验，不敢买，
这个趋化因子包括跨膜型和分泌性两种，分泌性的我用ELISA测过，结果跟预期相符，但我的课题主要关注的是跨膜型的所以得把Western blot 做好
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