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【求助】PEI转染问题

liufengxi 我用PEI(sigma 25kDa)作为转染试剂,但是发现,同样的细胞,同样的N/P 条件下。转染效果一次比一次要差,难道是PEI容易在水性条件下降解?我们的这个PEI买的时间比较久了,不知道是不是该买新的了。一直找不出原因,很是郁闷,请大虾帮忙解答,dafang0212 PEI粉末放置久了后,是会出现转染效率变差的状况的。另外不知道你的PEI用做转染前有进行加热处理吗?PEI在4度或者-20中放置一段时间后会 ...

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【求助】caspase-3抗体与激活型caspase-3抗体

环佩从容 要做下一步实验啦,这两个抗体选哪个呀,目前研究有没有区分哪一个更好点啊ronaldo_zj 楼主您好。1. 楼主需要知道Pro caspase-3以及Cleaved caspase-3的功能以及检测手段,不是说哪个好那个不好的问题,而是根据你的课题需要检测何种片段的问题。请楼主先具体查阅关于caspase活化的文献后再定好实验计划;2. 目前多数研究均认为Cleaved caspase-3的表达水平与caspase的活化密切相关 ...

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【求助】请教,用DMSO溶解sp600125的相关问题

大鱼1044 本人是新手,想请教一下各位老师或者高手关于用DMSO溶解sp600125的相关问题。一、sp600125是固体,无法准确称取想要的剂量,如何用DMSO配置一定浓度的母液呢二、sp600125的保存温度为-20°,而且它属于MAPK抑制剂,而DMSO在常温下才呈现液体状,我将-20°保存的sp600125 加入在室温的DMSO中sp600125 会不会就已经完全变性了呢,整个过程是否需要低温操作呢?如果低温操作, ...

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【求助】问siRNA能否在大鼠体内转染并且起干扰作用?

晓晓317481504 请问问siRNA能否在大鼠体内转染并且起干扰作用? 文献有报道就是说体内的RNAi也能够正常的起作用。请问有没有老师做过这种实验?谢谢slytjiaofei siRNA肯定在大鼠体内发挥干扰作用,有很多相关文献,如下两篇楼主可以参考!http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21571310http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8113414晓晓31 ...

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【求助】关于血清饥饿诱导ERK通路的问题

coldwar911 原代细胞先用无血清DMEM孵育了24小时然后,然后实验组按不同的干预时间加入药物,理论上该药物应该能激活ERK通路,但WB结果竟然显示空白对照组的p-ERK 含量最高,比实验组还高,请问有没有大侠能解释?coldwar911 Thanks, I'll try.sadieshen 我也有相同困难,饥饿时间是不是不能太久本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好 ...

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【求助】胃泌素的蛋白水平检测方法

qqljwar 各位战友:小弟想通过蛋白水平去检测胃泌素的表达量,但不知道具体用什么方法,有没有哪位前辈做过这方面的检测,指导下小弟,感激涕零啊!forest22939 Western blot is direct method, second is choosing subtract.qqljwar forest22939:你好,胃泌素比较小,好像只要2kd左右,Western检测的效果不是很好,另外你说的subtract 是什么,忘赐教! 谢谢。本文由丁香园论 ...

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【求助】细胞周期阻滞在G2/M期

cpuyao 请教大家一个问题,我在药物处理后测定细胞的周期,随着药物浓度的增加,G2/M期比例增加(明显,浓度依赖),S期几乎没有变化,而G1期比例减少。是不是说明细胞阻滞在G2/M期?但是G1期和S期的现象怎么解释呢?随后我们测了凋亡,证明药物可以促进细胞凋亡,这些需要怎么联系到一起呢,第一次做,有好多不明白的地方,希望研究周期和凋亡的战友们帮忙分析一下,有没有哪些相关的文献?谢谢大家~xiaohuilang 细胞周期被 ...

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【求助】如何通过基因多态性位点预测可以与该SNP点结合的microRNA呢

俊桃桃 想问问,有没有一些预测网站。通过某些基因3'UTR区的rs位点预测出与该点相结合的microRNA呢?谢谢lide658 目前好像没有这样的网站,所以你只有先确定靶基因然后与其结合的microRNA位点是否存在多态,而且一般要求SNP位于microRNA的种子序列中最好。俊桃桃 谢谢你,我是已经靶基因(通过文献查到的)不是通过软件预测的。但是我怎么知道他和microRNA结合的区域呢在哪里,更不知道结合区域是否存 ...

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【求助】XbaI和EcoRI双酶切构建时出现空载

wj1989113 最近在构建一个质粒。根据我的目的基因序列,筛了两个酶切位点,而且只有这两个酶切位点能用,XbaI和EcoRI,设计引物时XbaI 加了两个保护碱基,EcoRI 加了三个保护碱基。根据takara公司的说明,选择了共用Buffer1xM,酶切,连接,转化之后挑克隆,抽质粒酶切鉴定,发现都是空载体。网上说XbaI对甲基化敏感,有什么对策?因为我别无他选,只能用这两个酶。不胜感激!!!gisang 双切之后跑电泳了吗,有 ...

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【求助】为什么预测的miRNA的靶基因在NCBI中找不到?

nvonne 我在做靶基因预测时,有一个靶基因是NCR3( ENST00000376069),但是我在NCBI中查找时,NCR3的几个mRNA形式都和这个号不同,怎么回事呢?请高手帮忙!非常感谢!forest22939 Do u use the microchip to predict the target gene? If in this case, ask the tech support , suppose it is an error.mrliuw ENST00000376069,这个ENST应该是ENSE ...

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【求助】绿色荧光蛋白转染问题

liufengxi 最近使用pEGFP(增强型绿色荧光蛋白基因)做的转染,虽然转染细胞阳性率不低,但是绿色荧光蛋白表达跟以前相比较很少(转染剂量是一样的)。最初怀疑是细胞状态问题,重新复苏细胞后,没有改善;后将Hela细胞换为HepG 2细胞后,结果仍然不理想。我怀疑是不是我们的质粒突变了呢,就是转录或者是表达蛋白的能力下降。因为有一批提的质粒做的转染根本没有表达。请大虾们给支支招哈!思路迪病毒 liufengxi wrote: ...

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【求助】caspase-3检测问题

bin1986 最近在做凋亡,在用凯基的caspase-3分光光度法试剂盒检测细胞经过与药物孵育24小时后检测用酶标仪检测,OD值在0.1-0.3之间,有一定浓度依赖,高浓度下caspase-3的活化程度有差不多4问题在于,我用BCA蛋白定量得到的蛋白浓度时30多ug/ul,我加了有250ug,如果按照说明书的话,这个OD值应该在1左右,而我的最高才0.3.另外我的control孔(没加药)与我最低浓度的值差不多。问题 1. 我 ...

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【求助】哪个公司可以设计MLPA探针

小嘴鱼 问了几家现在都不做MLPA,不知哪家公司现在还做MLPA探针和检测,费用大概多少biolinkphilic 我帮你咨询一下佰而林生物做不做吧tianjia19851985 多重连接探针扩增(MLPA)技术服务:厦门基科生物科技有限公司竭诚为您提供MLPA探针设计、高纯度MLPA探针合成等服务。厦门基科生物科技有限公司可以按照您的实验需求个性定制MLPA实验方案。为您建立自己的一套MLPA体系。可联系0592-2 ...

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【求助】gastrin怎么溶解?

ez815 各位战友,请问gastrin怎么溶解?我买了想加在细胞培养液中,但不知道粉末怎么溶解?急呀!紧急求助!在此谢过!zhujoker http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=gastrin看看人家是怎么做的?kuailecaoyang 请问一下问问题的战友已经知道怎么溶解了吗,gastrin?我也想做,但是也不知道如何溶解。本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷 ...

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【求助】miRNA mimic qRT-PCR检测可以提高多少倍?

nvonne 我购买的miRNA mimic 带FAM标记,本打算用流式检测转染效率,但发现荧光信号很弱,转染后采用定量PCR检测miRNA的表达变化,相对定量分析,发现mimic组比NC阴性对照组的miRNA表达量提高了100多倍,这虽然表明转染mimic成功,但总感觉这么高的变化有点太离谱了是不是?也没查到相关文献,谁能给我一些参考?非常感谢zhujoker 顺转就是这么高,我的也是这样,有的能够上调1000倍nvonne ...

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【求助】求可以用Sal酶切位点重新构建的质粒

lf2003128245 本人手上有个慢病毒的质粒,目的基因是通过SalI酶切位点插入的,我想将这个基因切下来重新构建,希望有经验的大侠能够指点,可以选择些什么样的质粒呀,最好是带有GFP标记的非病毒质粒,还有个问题请教就是,病毒载体是不是不需要类似于G418筛选的标记呀?如果我找到个质粒,将这个基因连上去之后,怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题?谢谢了!fjxie 目的基因是通过SalI酶切位点插入的,我想将这个 ...

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【求助】磷酸化的Akt不见了!!

米宝 这俩天做实验,极其郁闷。我做的总AKt和pAkt,大鼠脑组织,第一次跑总AKT的时候,我觉得可能是因为蛋白是提取的浓度比较好吧,出来了一条浓浓的条带,三组总AKt都出了,接下来做pAkt,就出了一个带,效果挺明显的。后来再做pAkt的时候,跑了4张膜,显影的时候,太干净了,上面什么都没有,甚至连个杂带,斑点 都没!实验是在实验员的领导下完成的,技术上基本没什么纰漏,查阅本版面有关这问题方面的介绍,有的解释说pakt降解了 ...

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【求助】关于U0126

dj070886 从CST新买了一支U0126,是冻干粉,而且是用CST公司那种装抗体的管子装的,没有封口,请问这种状态下的粉子是有菌的还是无菌的?求助啊,求助chp_cn 应该是无菌的,你应该到culture hood中稀释好,分装到无菌的小管中保存。good luck!seagate 就算有菌,拿dmso溶解为母液就可以用了,dmso号称万能溶剂,本身就有强大的杀菌能力吕文明 既然提出来了这个抑制剂,我问一个问题:U0126 作为RAS ...

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【求助】自噬抑制剂3MA该如何溶解?

yesezhizhong 小弟购买的是SIGMA的3MA,50mg/瓶,拟配制工作液浓度1.5mg/ml, 不知道该3MA的母液该如何配制?用什么溶解?该如何保存?请高手指点!万分感谢!!chp_cn This product is soluble in DMF (10 mg/ml, may require gentle heating), yielding a clear, colorless solution. It is also soluble in water, 95% ethanol, or 1 N NaOH at 30 mg/ml with he ...

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【讨论】军事医学科学院-微生物流行研究所-分析微生物实验室 招收联合培养研究生

einsteininchina 军事医学科学院-微生物流行研究所-分析微生物实验室 招收联合培养研究生实验室:军事医学科学院-微生物流行研究所-分析微生物实验室,是“病原微生物生物安全国家重点实验室”的组成部分。地址:北京丰台东大街。招收形式:联合培养硕士或博士生,签署官方的联合培养协议;学生本人必须与母校导师事先协调好。要求专业背景:生物、医学、农业相关专业研究课题:课题在我们实验室做,做我们的课题。回原学校毕业。主要研究内 ...

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