wwdcom2 wwdcom2 这一现象已被重复很多次，也被其他学者所证实具体是这样的oxLDL刺激内皮细胞后，引起TGF-beta的表达增加，下游Smad3磷酸化并入核，在核内聚集。而TGF-beta/Smad3信号通路抗炎作用也已达成共识。可是没有学者给出oxLDL刺激后该信号通路增加后，与炎症蛋白同步的解释。我给老板的解释是oxLDL刺激后，诸如AP-1\NF-KB不能无限增加，而对抗因素-也就是诸如TGF-beta ...

timt75 如题，我要检测一个基因的外显子中某段polyA(10）是否存在缺失突变，应该如何检测？测序是否合适？测序后polyA后出现杂峰，测序能否看出缺失突变？后面的杂峰是杂合突变引起还是ployA本身检测引起？盼回复！谢谢！timt75 请帮忙！谢谢！zhujoker 最精确的还是应该是测序，“测序后polyA后出现杂峰，测序能否看出缺失突变？”我想问问你你是否测过，再说在这种情况下你问专门的测序公司的技术支持不是更好解 ...

紫琳儿 大家好，我想请教大家一个问题：今儿上午在实验室将 100mg TPCK和 1mg的 PD98059分别溶于1ml DMSO 溶解之后，将其抽取0.5ml加入到1.5ml的无血清RPMI-1640培养液中，TPCK立马就发生化学反应生成粉红色的混浊物。而PD98059静置几分钟后也变成了黄色的混浊物。但是之前PMA也是同样的方法先溶解于DMSO，再溶解无血清RPMI-1640培养液 中。没有浑浊现象发生。问题：1、为什么？2、如果我都用D ...

flower1946 菜鸟求助各位大虾，要做miRNA的实验，现已知可以查某个特定miRNA的有哪几个调节靶点，那反过来，如果要查调节某个特定蛋白（如MMP-7）的miRNA，该如何查呢？谢谢！zhujoker 可以使用targscan等软件啊，其实现在很多网站都有了，包括sigma也有一些预测flower1946 感谢楼上295546 TargetscanmiRdb本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及 ...

pollution_ocean 最近在筛选乳腺癌组织标本，发现了一个位点的突变，很是欣喜，结果查证后，发现原来是同义突变，不知道这样的同义突变在写文章或者是今后的研究当中是否还有意义呢？足下客 据我的了解，以前筛选与乳腺癌有关的SNP位点时，有一些同义突变的位点也是与癌症的发生显著相关的。但是这种情况不是很多。很大程度上要看运气了。bigbang_0_0 同义突变可能产生如下六种效应，其中的一种或几种可以用来解释患病机理：1 ...

dlh110 我构建了个microRNA的带GFP标签的质粒，不知道能不能与目的基因的3’UTR luciferase报告载体共转来检测luciferase的活性？bigbang_0_0 这个实验还要谨慎考虑一下，GFP的绿色荧光可能会干扰luciferase检测结果。另外你说的microRNA带GFP标签，你要保证两个东西都要有表达且保持活性，建议你最好把这两个东西构建成两个转录单位，由两个启动子分别起始两个东西的转 ...

xiaonichi 我现在在做一个蛋白，命名为fkbp38，按道理应该是38kd。因为同家族的fkbp12为108aa，约12kd但现在在ncbi上找到的序列，人的有413个aa，显示的分子量为44-45kd左右这是啥原因呢？xianyuanshan 楼主找到的是这个吗？—— NP_036313peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP8 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protei ...

lilyfisher 红色的是复制出的DNA，那么在后随链中的复制是不连续的，如“最后一个冈崎片段”所示，我想请教一下，是不是书上写错了，应该是5/呢，谢谢。slytjiaofei 书没有错，随从链最后复制完的是3’端，对于新合成的子链而言最后合成出的是5’端。lilyfisher 非常感谢您的帮助。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiong ...

lilyfisher 为什么叫做反向重复序列，我反着读没有读出什么规律，能不能指点一二？如铅笔所指。请问N指的是什么核苷酸，谢谢biolinkphilic 就是说双链DNA，从5‘端开始读序列是一样的。N指的是ATCG四者之一，不确定。lilyfisher 请问从5‘端开始读序列是一样的吗，我做出互补的另一条链AATANGTNT，不管是正着读还是反着读也是不一样啊，我哪里理解还不对。请指点下下，谢谢。lmnsmu 是4个反向重复 ...

sahalafeisha 我们之前在动物模型中检测microRNA方法用SYBR方法，没有用Taqman方法，内参用得是5s，现在想在细胞上作实验，仍然是先提取microRNA，再加尾POLYA，再反转录，然后SYBR方法PCR，是不是还可以继续用5s作内参，还是必须得换成U6，如果要换的话，求U6引物序列及方法，多谢各位高手～willion1985 还可以继续用5s作内参驼走西域 求5s 逆转录和RT-PCR上下游引物本文由 ...

magichunter 我在文献中查到，PPARr拮抗剂GW9662可以抑制药物的抗炎作用，前提是药物是通过激活PPARr来实现其抗炎作用的。即炎症细胞中的炎症因子（如：NO）升高，加入抗炎药物后，NO水平降低，当同时给予GW9662和该抗炎药物时，该药物的抗炎作用被抑制，NO水平再次升高。以上是文献的报道，但是我在实验时发现，加入了抗炎药物+GW9662后，NO的水平不但没有升高，反而降低了（与单独抗炎药物组相比），不 ...

zqm0815 新鲜全血离心去掉血浆后，剩下的血细胞可以保存起来以后用于提取DNA吗？如何保存，可以保存多长时间？谢谢！lide658 可以用于提取DNA，我们是放在-20保存的，放-80也可以，一般保存2-3年都可以提取基因组DNA。业精于勤荒于嬉 可以用来提取DNA，保存的时间可以是很长的，尤其是放到-80度冰箱中。也可以提取后保存，DNA降解很慢，比较容易保存。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷 ...

shewotwzqishui 大家好！请教一个问题：本人已经稳压了一个过表达的突变型细胞系，现在想在此基础上设计一段siRNA或shRNA，瞬时干扰或稳定沉默掉内源的，不知是否可行，设计这段序列、稳压的过程中需要注意哪些问题？谢谢。lixiaoling633 设计mRNA CDS前的区段吧bigbang_0_0 可以设计在CDS区，也可以设计在UTR区，前提是特异性良好，可使用相关的在线软件设计，前提是这个基因对于细胞的正常生 ...

阿兰梦 之前没有做过，只是根据文献的简单描述依葫芦画瓢，但是毕竟是好几千的试剂，生怕弄错了临床医生一下子做科研，确实很多地方不懂，很艰难目的是想用双荧光素酶报告基因的方法检测药物内皮细胞的NF-KB的转录活性影响，需要买pNF-kB-Luc 报告质粒，碧云天有；然后需要双荧光素酶报告基因检测系统，promega有；另外还需要一个内参，文献是β-半乳糖苷酶问题是：1、不知道买哪一个对：http://www.promega.com. ...

馃芝 求高人指点一些关于细胞凋亡的文献，最好是研究进展方面的，谢谢belovedf 细胞凋亡，好广的范围，最近我也在关注这方面，因为我的导师的方向之一也是细胞凋亡。问到我具体的研究方向就把我问倒了。昨天听了丁树哲教授有关运动适应的信号传导研究进展，其中有涉及一些细胞凋亡信号途径http://news.dxy.cn/bbs/topic/18108752?tpg=1&age=0抗凋亡诱导抗肿瘤请问您是体外培养细胞，研究细胞凋亡，还 ...

qingyu2010 打算挑战一下传说中的EMSA所以需要学习提取核蛋白了~不过因为还是菜鸟所以有个小问题。。。我想先做western检验一下核蛋白和胞质蛋白分离的好不好，该选择什么蛋白来检测呢？当然最好能是常用的或者以后也用的上抗体的蛋白啦~对于核蛋白，是不是用histone或者laminin或者大多数转录因子都可以？Thermo的网页上给的是OCT-1，某文献里是SP-1，我用c-Jun之类的OK么?_?对于胞质 ...

lilyfisher 黄嘌呤有可以有不同的2种分子式？谢谢。lx7051178 一看就是有机化学没学好。酮式和烯醇式互变异构听说过吗？@_@lilyfisher 感谢您的帮助。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

lilyfisher 半胱氨酸和同型半胱氨酸是不是同一个物质，或者说它们结构上有什么区别，谢谢slytjiaofei 当然不是同一个物质，可以参考人卫版生化中氨基酸代谢一章！！！lmnsmu 半胱氨酸与同型半胱氨酸不同，同型半胱氨酸 比半胱氨酸多一个CH2，同型半胱氨酸是甲硫氨酸脱去-SH上甲基后的产物。甲硫氨酸（蛋氨酸）在甲硫氨酸循环中首先活化生成S腺苷甲硫氨酸，提供甲基后转变成S腺苷同型半胱氨酸，然后脱腺苷生成同型半胱氨酸 ...

阿兰梦 看了文献测活性RhoA 有几种方法：1、经典的，是放射标记γ32-P-GTP 方法，因为放射性，现在不怎么用了。2、看到国内有文献，采用分离胞膜胞浆，然后用抗RhoA抗体做western。这是基于胞浆都是GDP-RhoA，胞膜是GTP-RhoA的原理，但是总觉得有什么不对的地方？为什么没有被广泛采用？3、现在多采用 pull down方法，RhoA-GTP与Rhotekin的RBD结合，最后用RhoA抗体检测沉淀物中RhoA-GT ...

陈蛋蛋1号 本人想从石蜡切片中提取RNA，希望有经验的高手指点下迷津呀！lmnsmu 石蜡组织中RNA降解很多，不是很好做。我没有做过，在查资料时看到promega有个试剂盒可以从石蜡里提取RNA，具体编号不清楚。陈蛋蛋1号 lmnsmu wrote:石蜡组织中RNA降解很多，不是很好做。我没有做过，在查资料时看到promega有个试剂盒可以从石蜡里提取RNA，具体编号不清楚。好的！谢谢~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、 ...